存在于實(shí)驗室桌面、儀器、耗材以及空氣中的DNA污染,對于實(shí)驗會(huì )產(chǎn)生嚴重的干擾,尤其是氣溶膠攜帶的DNA分子(一個(gè)氣溶膠能攜帶上萬(wàn)個(gè)DNA),因在空氣中漂浮,難以消除。本文締一生物/締一生物為您分析如何治理實(shí)驗室的DNA氣溶膠污染。
1、氣溶膠很容易在移液器加樣的時(shí)候產(chǎn)生,因此是不可避免的。它會(huì )很快地發(fā)生沉降。因此,經(jīng)常使用專(zhuān)門(mén)的DNA污染清除劑,如德國Minerva公司的PCR Clean噴霧劑和濕巾產(chǎn)品,對阻止DNA污染的擴散,無(wú)疑是一個(gè)不錯的選擇。
2、直接針對氣溶膠的,就目前所知,只有空氣過(guò)濾系統。氣溶膠可以被過(guò)濾材料所吸附。因此,任何使形成氣溶膠的危險性上升的操作都必須在生物安全柜或通風(fēng)柜里進(jìn)行,或者是開(kāi)通實(shí)驗室空調通風(fēng)系統。如果不具備以上條件的,也應多注意房間通風(fēng)。
3、PCR實(shí)驗室內部區域進(jìn)行區隔。PCR實(shí)驗室原則上分為四個(gè)區域,即試劑準備區、樣品處理區、擴增區、擴增產(chǎn)物分析區,前兩區為擴增前區,后兩區為擴增后區。擴增前區與擴增后區應嚴格分開(kāi)。實(shí)驗材料、試劑、記錄紙、筆、清潔材料等,只能從擴增前區流向擴增后區,即從試劑準備區→樣品處理區→擴增區→擴增產(chǎn)物分析區,不得逆向流動(dòng)。實(shí)驗室的氣流也應從擴增前區流向擴增后區,不得逆向流動(dòng)。
4、建議逐漸用熒光定量PCR取代常規PCR,因為熒光定量PCR能顯著(zhù)減少了實(shí)驗室PCR產(chǎn)物污染的可能性。PCR產(chǎn)物是轉基因檢測實(shí)驗室zui主要的污染來(lái)源之一,而熒光定量PCR不需要電泳,因此反應結束后不需要開(kāi)蓋,避免了反應產(chǎn)物泄漏造成的污染。而進(jìn)行凝膠電泳增加了檢測步驟,易產(chǎn)生氣溶膠污染。建議推進(jìn)定量PCR的應用,并逐步替代定性PCR。
5、值得注意的是,要祛除DNA污染而不是僅僅滅菌的話(huà),常規紫外線(xiàn)照射建議應延長(cháng)至2小時(shí),即使這樣,紫外照射對祛除小片段(200bp以下)的DNA污染效果仍然不佳(參考文獻:UV irradiation and autoclave treatment for elimination of contaminating DNA from laboratory consumables. 《Forensic Science International Genetics》, 2010,4(2) :89)。這時(shí)還應考慮其他的方法。
綜上所述,您是不是已經(jīng)對如何治理實(shí)驗室的DNA氣溶膠污染,有所了解。如果還有其他疑問(wèn),請咨詢(xún)締一生物/締一生物資深專(zhuān)家。