培養的珍貴細胞如果出現支原體的污染,細胞要保種,不舍得丟掉,我們知道可采用Minerva公司的Mynox或Mynox Gold祛除支原體(具體詳請點(diǎn)擊文章《細胞狀態(tài)不好,你排除過(guò)支原體嗎?》),如果出現細菌污染,我們應該怎么辦呢?
對于細胞系,這的確是一個(gè)難題。小威根據北京市耳鼻咽喉科研究所在一篇文章中發(fā)表的幾種解決方法,總結如下,可供感興趣的人員參考。
*種方法: 抗生素除菌法
在該文中,當一種人喉癌細胞系被懷疑有細菌污染時(shí),研究人員將培養上清液離心,將沉淀物行常規血瓊脂培養,培養5-7d后開(kāi)始出現灰白色細小菌落,經(jīng)全自動(dòng)細菌鑒定儀生化鑒定條檢測為嗜麥芽寡養食單胞菌,又進(jìn)行了15種抗生素的藥敏實(shí)驗,發(fā)現該菌對其中3種抗生素敏感,其余均耐藥,包括對青鏈霉素耐藥。
圖 對多種抗生素耐藥的嗜麥芽寡養食單胞菌
接下來(lái),研究人員進(jìn)行了抗生素*抑菌濃度的篩選。每種抗生素配了6個(gè)濃度梯度。將受污染的細胞接種到96孔板,加入含敏感抗生素的*培養液,24 h后換無(wú)抗生素培養液培養1d。如此重復3次,連續7d。找出*抑菌濃度后,研究人員讓細胞分別在抗生素*抑菌濃度中傳代1代至3代,發(fā)現細胞生長(cháng)良好,但撤離抗生素后,重又出現細菌污染。
作者認為:抗生物主要是抑制細菌生長(cháng),而不能*殺死細菌。因此,有針對性地使用抗生素或許可以短期控制住細胞中污染細菌的生長(cháng),但不能*細菌。
第二種方法: 抗生素聯(lián)合巨噬細胞吞噬法
即抗生素處理過(guò)的細胞再與小鼠的巨噬細胞共培養3d。3d后換液,棄去巨噬細胞。間隔一周后再用巨噬細胞共培養一次。結果顯示,此方法效果不佳。
第三種方法: 裸鼠體內接種法
研究人員將受污染的喉癌細胞系細胞按1×106個(gè)/ml接種裸鼠腋下皮下,連續觀(guān)察,當腫物長(cháng)至約1cm3后,脫頸處死動(dòng)物,無(wú)菌操作取出腫物,做組織細胞培養。
結果顯示,腫瘤細胞接種裸鼠體內40 d后開(kāi)始出現腫塊,60d長(cháng)至1cm3左右。之后將組織塊培養于含上述篩選過(guò)的三種抗生素的*培養基,14d后改用無(wú)抗生素培養,持續培養3周。結果細胞生長(cháng)良好。之后自然傳代8次,凍存1個(gè)月后復蘇,細胞仍能貼壁生長(cháng)。取上清液做細菌培養,結果為無(wú)菌生長(cháng)。
作者認為,細菌在裸鼠體內可被巨噬細胞和中性粒細胞吞噬、NK細胞殺滅,以及被結合抗體的補體殺死。裸鼠體內接種法能*殺滅細菌,細胞上清的細菌培養為陰性。細胞生物學(xué)特性也保持良好。
因此,敏感抗生素的篩選和使用可以短期清除污染菌,而動(dòng)物體內接種才是zui有效和*的除菌方法。雖然上述受污染的細胞屬于腫瘤細胞系,但對其他受污染的細胞,也會(huì )帶來(lái)一定的啟示。
參考文獻
王鴻,張偉,孟娜。 細胞培養中珍貴貼壁細胞污染挽救方法的評價(jià)。 首都醫科大學(xué)學(xué)報。2011,32(1):129-134
Minerva Biolabs GmbH公司簡(jiǎn)介
德國Minerva Biolabs GmbH 公司是世界上的微生物污染控制公司。其zui引以為豪的研發(fā)核心,體現在細胞培養和生物制藥領(lǐng)域的支原體、細菌和病毒污染控制,其產(chǎn)品和技術(shù)在世界上遙遙。 公司總部設立于德國柏林,專(zhuān)注微生物污染檢測與清除產(chǎn)品的研發(fā)和銷(xiāo)售。 公司創(chuàng )始人來(lái)自于聞名的羅伯特·科赫微生物研究所。Minerva公司zui引以為豪的研發(fā)核心,體現在細胞培養和生物制藥領(lǐng)域的支原體、細菌和病毒污染控制。
此外,Minerva研發(fā)的用于『PCR診斷法的專(zhuān)業(yè)工具和試劑』,不僅可以檢測飲料中的微生物污染,還可以用于檢測未申報的肉類(lèi)制品以及清真、素食產(chǎn)品的質(zhì)量控制。再加上『驗證PCR儀合格性的試劑』以及『清除PCR實(shí)驗室DNA污染的試劑』,多種產(chǎn)品完整了Minerva的產(chǎn)品線(xiàn),能夠滿(mǎn)足客戶(hù)全方面的需求。在污染控制,臨床診斷和水質(zhì)的檢測領(lǐng)域,Minerva不遺余力地開(kāi)拓進(jìn)取,是實(shí)驗人員和生產(chǎn)企業(yè)值得信賴(lài)的合作伙伴。Minerva公司作為合作制造商,還從事分子生物學(xué)試劑、PCR分析和樣品制備試劑的設計與生產(chǎn)。
2005年,上海締一生物生物科技有限公司作為全國總代理,將Minerva的產(chǎn)品引入中國。數年來(lái),不斷為中國生物研究實(shí)驗室,以及眾多疫苗生產(chǎn)企業(yè),提供了完整的,支原體等微生物檢測及祛除解決方案。