細胞培養基是細胞培養好壞的重要決定因素。近二十年來(lái),無(wú)血清培養基越來(lái)越受到重視。它不含動(dòng)物血清或其他生物提取液,仍可使細胞在體外較長(cháng)時(shí)間生長(cháng)、增殖或維持。它繼天然培養基、合成培養基之后發(fā)展而來(lái),尤其應用于哺乳動(dòng)物細胞的大規模工業(yè)培養。同時(shí),它也是研究細胞生長(cháng)、增殖、分化及基因表達調控的有力工具。
常規培養基在基礎培養基中添加了一定量的血清或組織提取物,它存在以下優(yōu)缺點(diǎn):
優(yōu)點(diǎn):
(1)血清作為天然培養基,含有豐富全面的細胞生長(cháng)必需的營(yíng)養,具有極為重要的功能。
(2)提供維持細胞指數生長(cháng)的激素、生長(cháng)因子以及一些低分子營(yíng)養物。
(3)提供的結合蛋白,能識別維生素、脂類(lèi)、金屬和其他激素等,調節其活性。
(4)提供的結合蛋白質(zhì)能與有毒金屬和熱原質(zhì)結合,起到解毒作用。
(5)是細胞貼壁、鋪展所需的因子來(lái)源。
缺點(diǎn):
(1)血清有時(shí)含有細胞生長(cháng)抑制因子和毒性因子,存在潛在毒性。
(2)血清獲取成本高,價(jià)格較貴。
(3)血清由于成分不太明確,,給細胞培養的標準化帶來(lái)困難,同時(shí)也給細胞表達的目的產(chǎn)物純化帶來(lái)困難。
由于常規培養基存在的上述問(wèn)題,無(wú)血清細胞培養基的開(kāi)發(fā)和應用漸成趨勢。無(wú)血清培養可在很大程度上可以避免血清所帶來(lái)的不利,但它同時(shí)也有一些不足。其優(yōu)缺點(diǎn)具體如下:
優(yōu)點(diǎn):
(1) 其組成明確,可避免血清不同批次帶來(lái)的質(zhì)量變動(dòng),提高可重復性。
(2)避免血清對細胞的毒性作用和血清源性污染風(fēng)險。
(3)避免血清不明組分對實(shí)驗研究的影響。
(4)有利于體外培養細胞的分化。
(5)可提高細胞產(chǎn)物的表達水平并易于純化。
缺點(diǎn):
(1)細胞在無(wú)血清培養基中易受某些機械和化學(xué)因素的影響,培養基的保存和應用不如傳統的合成培養基方便。
(2)成本較高。
(3)針對性很強,一種無(wú)血清培養基僅適合某一類(lèi)細胞的培養。
(4)無(wú)血清培養基由于營(yíng)養不如血清全面,可能存在潛在的營(yíng)養不足。
締一生物為您介紹一款可用于Vero細胞無(wú)血清培養[1]的SFRE199培養基。它可作為基礎培養基,再添加其他成分后可用于Vero細胞的無(wú)血清培養。它對傳統培養基M199進(jìn)行了改良,開(kāi)始是用于狒狒原代腎細胞的培養,由生物公司HiMedia公司生產(chǎn)。
SFRE-199系列將M199配方中的部分成分進(jìn)行了調整:精氨酸增至150mg/L,半胱氨酸增至4mg/L,胱氨酸增至40mg/L,谷氨酰胺增至300mg/L,谷氨酸增至75mg/L,甘氨酸增至100mg/l,組氨酸增至40mg/L,酪氨酸增至80mg/L,以獲得較好的細胞生長(cháng)而未表現出毒性。
SFRE199-1和SFRE199-2二者均含有L-谷氨酰胺、半乳糖和葡萄糖。SFRE M199-2(貨號AT090)含有Earle's鹽,而SFRE M199-1含有Hank鹽。兩種鹽的主要差別在于碳酸氫鈉的水平, 碳酸氫鈉在Eagles (2.2g/L)比在Hanks (0.35g/L) 中高。選用哪種取決于培養環(huán)境中的CO2濃度。
參考文獻
[1] Jack Litwin.The growth of Vero cells in suspension as cell-aggregates in serum-free media. State Bacteriology Laboratory, 105 21 Stockholm, Sweden.
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