M199是經(jīng)典的細胞培養基,也常作為疫苗生產(chǎn)用的培養液,用于地鼠腎細胞、原代雞胚細胞、Vero細胞的大規模培養。這其中,也添加有新生牛血清,水解乳蛋白等。
近年有文獻報道,改良的M199比經(jīng)典的M199的效果更好1。但具體的改良配方并未透露,只提到調整了氨基酸等營(yíng)養成分的配比。因此,如果在不升高成本的情況下,改用改進(jìn)后的M199培養基,會(huì )帶來(lái)更好的細胞培養效果和經(jīng)濟效益。
在現有培養基中,SFRE199是值得關(guān)注的,它恰好是M199的改良型。它的改進(jìn)方面主要為:1、升高了葡萄糖和8種氨基酸(精氨酸-鹽酸、半胱氨酸、胱氨酸、L -谷氨酰胺、L -谷氨酸、甘氨酸、組氨酸、酪氨酸)的濃度,使其達到促進(jìn)細胞的大活力,而又不產(chǎn)生毒性;2、加入了硫酸鋅、丙酮酸鈉和魚(yú)精蛋白鋅胰島素。3、降低了硝酸鐵、黃嘌呤和碳酸氫鈉的濃度。4、加入了半乳糖。實(shí)驗發(fā)現,半乳糖可使細胞培養液中的乳酸降低54%3,使pH保持穩定。
SFRE199初是用于原代狒狒腎細胞的培養3,后來(lái)也有用于牛輸卵管峽部上皮細胞和壺腹上皮細胞的培養。其特點(diǎn)是,都只用了SFRE199,而沒(méi)有添加血清,細胞的培養效果仍然理想。值得注意的是,原代細胞較細胞系難培養,因此,SFRE199中升高的氨基酸和葡萄糖濃度,顯然更有利于原代細胞的生長(cháng)。同時(shí),上述細胞都屬于泌尿生殖系細胞。Vero細胞、地鼠腎細胞與上述細胞的起源相同,可以想見(jiàn),SFRE199也同樣非常有可能適用于這些疫苗生產(chǎn)細胞的培養。事實(shí)上,國外在1992年時(shí)即有報道3,用SFRE199作為化學(xué)限定培養基的一部分,用于Vero細胞的靜置培養和懸浮培養,只不過(guò)還添加了BSA和血清替代物等,并且發(fā)現,SFRE199培養的效果很好。而在實(shí)際應用中,用SFRE199替代M199,同時(shí)降低牛血清的用量,也是非常有可能的,從而降低生產(chǎn)成本。
在SFRE199對M199的改進(jìn)中,值得注意的是添加了硫酸鋅和胰島素。有研究者發(fā)現,如果在SFRE199中去除這2個(gè)成分,則細胞二倍分裂時(shí)間延長(cháng),細胞不能很快長(cháng)滿(mǎn),若含有這2種成分,則該培養基支持生長(cháng)的能力相當于標準對照血清培養基3。
因此,如果疫苗生產(chǎn)企業(yè)目前用的培養液是M199,則推薦更換為SFRE199,因為生產(chǎn)成本沒(méi)有增加,而細胞生長(cháng)和病毒滴度卻可有一個(gè)理想的結果。
參考文獻
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