發(fā)酵食品、飲品和酒類(lèi),一直受到大眾的廣泛喜愛(ài)。這其中尤其值得關(guān)注的是發(fā)酵乳(俗稱(chēng)酸奶)、奶酪、酸泡菜、豆腐乳、白酒等。但一些天然發(fā)酵食品缺乏相關(guān)的質(zhì)控標準,無(wú)法規?;a(chǎn),另一方面,新型發(fā)酵劑和發(fā)酵食品的開(kāi)發(fā),也有賴(lài)于進(jìn)一步展開(kāi)。
在發(fā)酵食品、飲品和酒類(lèi)中,乳酸菌是重要的一類(lèi)菌群。它是一群發(fā)酵糖類(lèi),并產(chǎn)生大量乳酸的細菌的總稱(chēng),它們分為球菌(鏈球菌、乳球菌、腸球菌、明串珠菌、片球菌等)和桿菌(乳桿菌、雙歧桿菌等)。多數為革蘭氏陽(yáng)性,兼性厭氧,多數具有耐酸性。一般鑒定多依據于《伯杰氏細菌鑒定手冊》和16s rRNA序列。
乳酸菌的菌屬、菌種組成和比例在發(fā)酵品的質(zhì)量和風(fēng)味上具有重要的作用。尤其是明串珠菌屬、乳酸乳球菌雙乙酰亞種等與發(fā)酵食品的口味和芳香氣味密切相關(guān)。另外,不同的發(fā)酵食品,其優(yōu)勢乳酸菌也不同。如在干酪中的發(fā)酵劑微生物,如乳酸乳球菌,明串珠菌屬,嗜熱鏈球菌,德式乳桿菌等,能快速發(fā)酵乳糖,產(chǎn)生高濃度的乳酸,提高凝乳酶的活性,有助于排除乳清和抑制有害菌的生長(cháng)。用于發(fā)酵果蔬的乳酸菌主要有嗜酸乳桿菌、植物乳桿菌、腸膜明串珠菌等。植物乳桿菌、短乳桿菌、腸膜明串珠菌和小片球菌,則是酸泡菜發(fā)酵中常見(jiàn)的幾種乳酸菌。
乳酸菌的分離,傳統上是用MRS平板,37度培養48h,然后挑選出菌落周?chē)型该魅Φ木?,將革蘭氏陽(yáng)性菌株繼續劃線(xiàn)于MRS平板,直至確定為純菌。再進(jìn)行乳酸菌屬的鑒定試驗,如過(guò)氧化氫酶陰性,另外,還需做明膠液化,吲哚試驗,硝酸鹽還原試驗等。再之后進(jìn)行菌種的鑒定,主要檢測碳水化合物的發(fā)酵結果,通過(guò)不同菌對單糖、二糖、三糖等的發(fā)酵狀況來(lái)區分。但這種方法的分辨率不夠高,不能進(jìn)一步作乳酸菌的內部區分。尤其是對風(fēng)味有重要作用的明串珠菌。有研究者指出,目前還沒(méi)有一種培養基能夠地從樣品中選擇性培養明串珠菌,而仍需要進(jìn)行形態(tài)學(xué)、生理生化以及分子鑒定才能終認定。
HiMedia廠(chǎng)家是的微生物產(chǎn)品生產(chǎn)商,每年至少研發(fā)15種新產(chǎn)品上市,產(chǎn)品線(xiàn)豐富,培養基種類(lèi)眾多,產(chǎn)品出口至世界120多個(gè)國家。其生產(chǎn)的顯色培養基有80多種,其中兩種與乳酸菌密切相關(guān)。一款是Nickels &Leesment顯色培養基(貨號MV1712),它可稱(chēng)為是明串珠菌的分離計數培養基。該培養基的配方是以美國公共衛生學(xué)會(huì )推薦的Modified Nickels and Leesment 培養基為基礎進(jìn)行了改良。通過(guò)與添加劑(貨號FD245)結合,它可將明串珠菌從乳酸菌的混合菌群中分離出來(lái),并可用于計數。
在該培養基上,接種后
25-30°C孵育48-72小時(shí),乳酸乳球菌雙乙酰亞種菌落是呈白色,有一個(gè)透明帶;乳酸乳球菌乳酸亞種和乳酸乳球菌乳脂亞種均為白色菌落,沒(méi)有透明帶。如果在培養基中事先加入添加劑萬(wàn)古霉素,則乳酸乳球菌被抑制生長(cháng),而明串珠菌可以旺盛生長(cháng),它的菌落為藍色,沒(méi)有透明帶(具體見(jiàn)下圖)。
這款乳酸菌顯色培養基也可以區分乳球菌與乳桿菌。乳球菌為白色,乳桿菌為藍色。
除了以上這款對乳球菌內部區分的培養基, HiMedia還有一款對乳桿菌內部區分的培養基(貨號:M2065)。在該培養基中,嗜酸乳桿菌菌落為淡粉色,鼠李糖乳桿菌為淡綠色,發(fā)酵乳桿菌為黃色,胚牙乳桿菌為淡綠色,但含有光暈(見(jiàn)下圖,接種菌為植物乳桿菌)。
該培養基也可選擇性分離乳酸桿菌,環(huán)丙沙星可抑制伴隨的菌群。
在酸乳制品中,常見(jiàn)的優(yōu)勢菌多以乳球菌為主,乳桿菌為輔。在蒙古地區自然發(fā)酵的牛乳和馬乳中,則常見(jiàn)乳桿菌(如干酪乳桿菌、瑞士乳桿菌)占優(yōu)勢。酸菜則發(fā)現存在植物乳桿菌和明串珠菌屬。乳酸乳球菌已被廣泛的應用于酸奶和干酪等食品的發(fā)酵。同時(shí),一些乳酸菌代謝產(chǎn)生的乙醛、雙乙酰等,與酸奶的芳香味、奶油香味息息相關(guān),而并非僅僅是作為益生菌發(fā)揮作用。因此,分離和鑒別乳酸菌(包括計數),對于發(fā)酵食品的質(zhì)控和開(kāi)發(fā)上,具有重要作用。而使用一些顯色培養基,則可帶來(lái)極大的便利。