牛血清是細胞培養基的重要組成部分,其質(zhì)量好壞對細胞狀態(tài)及數量增長(cháng)速度影響很大。常用的有胎牛血清、新生牛血清及小牛血清。牛的采血年齡是這三種血清區分的顯著(zhù)標志。小牛血清的采集對象是出生1年之內的小牛,新生牛血清是出生24小時(shí)至2周內的新生牛,胎牛血清則是6-10個(gè)月的胎牛。隨著(zhù)采血年齡的增加,牛血清中的生長(cháng)因子減少,抗體和補體等含量增加。因此,鑒別血清原料的采血年齡段,防止成牛血清的參入是血清品質(zhì)檢測者所面臨的一個(gè)重要問(wèn)題。
有研究人員通過(guò)不同年齡段的牛血清在不同濃度下對SP2/0細胞株培養效果的比較試驗,用大增殖濃度、倍增時(shí)間、克隆率等指標來(lái)推斷樣品血清的采血年齡段,其結果如下:
SP2/0細胞株為鼠骨髓瘤細胞。首先,研究人員在無(wú)菌條件下,將7個(gè)供試血清0.22μm過(guò)濾除菌,然后將供試血清按10%、8%、6%、4%、2%的濃度分別加到MEM培養基稀釋好的細胞懸液中使細胞濃度為1×104/ml。充分混勻后在96孔細胞培養板中每孔接種0.2ml,每個(gè)試驗樣接種8孔。每24 h記數一孔,共記數7d。研究人員又將供試血清按8%的血清濃度加到MEM培養基稀釋好的細胞懸液中,將SP2/0細胞稀釋到5個(gè)/mL,分別接種到96孔細胞培養板中,每孔0.2mL,每個(gè)供試血清樣品接種48孔,一周后計數克隆生成孔數。
結果顯示,在克隆率方面,采血年齡越小,效果越好,胎牛血清培養的細胞克隆率為85.4%,6h新生牛血清為79.1%,6月齡小牛血清為50%。在促細胞生長(cháng)效應方面,隨著(zhù)血清濃度從2%提高到10%,細胞大增殖數不斷升高,倍增時(shí)間縮短。血清濃度相同時(shí),采血年齡約越小,細胞數高,倍增時(shí)間越短。不同年齡段的牛血清對促細胞生長(cháng)效應的影響呈現比較明顯的差異性。
品名:Ausbian精制新生牛血清
貨號:VS500N
批號:1712A
規格:500ml/瓶
市場(chǎng)價(jià):1600元
歡樂(lè )價(jià):800元
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上海締一生物生物公司提供的Ausbian精制新生牛血清(貨號:VS500N)為澳洲進(jìn)口,血源來(lái)自新西蘭出生在4天內的新生牛。血清經(jīng)過(guò)嚴格質(zhì)控,如檢測總蛋白、支原體、牛病毒性腹瀉病毒、牛副流感病毒等,并經(jīng)0.22m過(guò)濾和gamma射線(xiàn)照射,指標達標,經(jīng)廣泛使用,受到好評。
參考文獻
李倬,等.促細胞生長(cháng)效應試驗對牛血清采血年齡段判定的探討.西北民族大學(xué)學(xué)報.2003,24(3):59-66