今天分享實(shí)驗室培養人員的培養細胞的心得,希望給做細胞培養新手啟發(fā)。怎么才能培養出符合條件的細胞呢?
1、選擇正確的培養基
在養細胞之前,就要了解,你所養細胞的來(lái)源以及種類(lèi)和名稱(chēng),查閱一定量的文獻,確定所需培養液種類(lèi)以及是否需要添加特殊成分,常用的細胞培養液有DMEM、RPMI1640、F12等等,一些常見(jiàn)的細胞基本可以使用這幾種培養基中的一種來(lái)培養,有的需要加入一定其他成分,這需要根據不同的細胞類(lèi)型,查ATCC細胞庫或者查文獻,才能找到所需的培養液。選擇正確的培養液是養好細胞的一步。
2、了解細胞的生長(cháng)習性
不同的細胞生長(cháng)習性不同。如成纖維細胞是貼壁生長(cháng),有一定的密度依賴(lài)性,密度小可能會(huì )出現不增殖,狀態(tài)差的情況,接種密度大時(shí)則需要隔天傳代,頻繁傳代則影響細胞狀態(tài);再如RPMI-8226人多發(fā)性骨髓瘤細胞,是懸浮生長(cháng)的,傳代需離心棄去上清即可??傊?,了解細胞生長(cháng)習性,再加上正確的計數,才能掌握好傳代的密度。
3、選擇優(yōu)質(zhì)的血清
血清中含有細胞生長(cháng)所必須的生長(cháng)因子,作為哺乳動(dòng)物細胞培養的附加物,血清的添加是十分重要的,因此,選擇優(yōu)質(zhì)的血清,是細胞養殖成功與否的關(guān)鍵!
4、及時(shí)傳代和更換培養液
在細胞增殖到一定的密度后,要及時(shí)傳代,根據細胞的生長(cháng)速度和密度,及時(shí)更換培養液。更換過(guò)勤,浪費培養液,更換不夠及時(shí),則細胞狀態(tài)轉差,一般需隔天更換培養液,具體可根據所養細胞種類(lèi)予以調整。
5、的無(wú)菌意識
前面林林總總全部都注意好了,如果無(wú)菌意識差,細胞中混入了微生物,則千里之堤潰于蟻穴,細菌的生長(cháng)速度和破壞力,將迅速占領(lǐng)培養皿,破壞細胞結構,有些初學(xué)者會(huì )在培養液中加入1%的雙抗,但是,無(wú)菌意識不強,雙抗亦無(wú)法拯救你的細胞!
6、傾心的呵護,頻繁的觀(guān)察
做到以上幾點(diǎn),就可以開(kāi)始養你的細胞了,但是再次重申細胞嬌弱,在養細胞的過(guò)程中,難免會(huì )出現一些意想不到的問(wèn)題,要想成功養好細胞,時(shí)時(shí)惦記它 ,頻繁地觀(guān)察,初期一天觀(guān)察2次都不足為過(guò),出現任何預料外的情況,及時(shí)處理,才能保障收獲一盤(pán)“漂亮”的細胞。