許多臨床和做科研的小伙伴們都要涉及到細胞培養,在細胞培養實(shí)驗中,血清無(wú)疑成為影響實(shí)驗成功與否的重要因素,而在眾多血清之中,牛血清是最為常用的。牛血清是細胞培養中用量最大的天然培養基,其中含有豐富的細胞生長(cháng)所必須的營(yíng)養成份,常用于動(dòng)物細胞的體外培養,具有極為重要的功能。牛血清是一種成分復雜的混合物,而且血清的組成及含量通常隨供血動(dòng)物的性別、年齡、生理條件和營(yíng)養條件不同而存在差異。牛血清主要成分有蛋白質(zhì),多肽類(lèi),激素類(lèi),其他成分 如氨基酸、葡萄糖、微量元素等。
一、胎牛血清的功能
血清的成分十分復雜,既有協(xié)助物質(zhì)運輸的蛋白、營(yíng)養物質(zhì),還有促進(jìn)細胞生長(cháng)的激素和因子等,正因為血清這種天然成分的復雜性,使得血清在細胞培養過(guò)程中發(fā)揮了多種功能:
1.提供維持細胞生長(cháng)的激素,促進(jìn)所培養細胞的生長(cháng);
2.彌補基礎培養基中沒(méi)有或含量很少的營(yíng)養物質(zhì);
3.提供結合蛋白,促進(jìn)細胞識別和利用維生素、脂類(lèi)和其他激素等;
4.某些情況下結合蛋白質(zhì)能與有毒金屬和熱原質(zhì)結合,起到解毒作用;
5.促進(jìn)細胞貼壁,提供可促進(jìn)細胞鋪展在塑料培養基質(zhì)的因子;
6.起酸堿度緩沖液作用;
7.提供蛋白酶抑制劑,使細胞消化時(shí)殘留的胰蛋白酶失活,保護細胞不受傷害。
二、胎牛血清有哪些重要的技術(shù)性指標?
1.內毒素:標準為不高于10EU/mL。內毒素是細菌破碎后細胞壁的成分,因此內毒素含量的高低可表現出采血到生產(chǎn)系列過(guò)程中的無(wú)菌操作情況。
2.總蛋白含量:胎牛血清總蛋白含量般范圍是30-50mg/mL,數值偏高,說(shuō)明采血的牛齡偏大,不是胎牛,數值偏低,表明血清可能摻水了。
3.血紅蛋白:標準為不高于30mg/dl,顏色越紅,數值越高。
4.pH:7.0~8.0。
5.微生物:包括細菌、霉菌、支原體、噬菌體、各類(lèi)病原性病毒等。
6.免疫球蛋白(IgG):免疫球蛋白的數值能*體現出采血時(shí)的牛齡情況,新生牛的血清中容易產(chǎn)生IgM,IgG的含量也偏高,進(jìn)口胎牛血清不含IgM,另外IgG的含量也較低。
科研實(shí)驗中,細胞的體外培養一直是一個(gè)重要環(huán)節。細胞要養好,就要用好血清,如Ausbian®特級胎牛血清,它適合各種細胞培養,尤其適合難養細胞,如:干細胞、肝細胞,神經(jīng)細胞,原代培養、細胞融合、轉染細胞等。