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      關(guān)于血清質(zhì)量的鑒定

      更新時(shí)間:2022-08-24  |  點(diǎn)擊率:534

      血清的質(zhì)量標準:血清質(zhì)量高低取決于兩方面因素:一是取材對象,二是取材過(guò)程。用于取材的動(dòng)物應健康無(wú)病并且在指ding的出生天數之內,取材過(guò)程應嚴格按照操作規程執行,制備出的血清要經(jīng)過(guò)嚴格的質(zhì)量鑒定。WHO公布的《用動(dòng)物細胞體外培養生產(chǎn)生物制品規程》中的要求:

      牛血清必須來(lái)自有文件證明無(wú)牛海綿狀腦病的牛群或國家。并應具備適當的監測系統。

      有些國家還要求牛血清來(lái)自未用過(guò)反芻動(dòng)物蛋白飼料的牛群。

      證明所用牛血清中不含對所生產(chǎn)疫苗病毒的抑制物。

      血清要通過(guò)濾膜過(guò)濾除菌,保證無(wú)菌。

      無(wú)細菌、霉菌、支原體和病毒的污染,有些國家要求無(wú)細菌噬菌體污染。

      對細胞有良好的支持繁殖作用。

      我國在對牛血清的質(zhì)量2000年版《中國生物制品主要原輔料質(zhì)控標準》中提出比較嚴格的標準要求。包括蛋白質(zhì)含量,細菌、真菌、支原體、牛病毒、大腸桿菌噬菌體、細菌內毒素,支持細胞增殖檢查。

      血清質(zhì)量的鑒定一般包括以下幾個(gè)方面:

      理化性質(zhì):如滲透壓、pH值、蛋白電泳圖譜、蛋白含量、激素水平、內毒素等。蛋白含量包括血清總蛋白含量(不低于35-45g/L)、球蛋白含量(應小于20g/L)、血紅蛋白含量等。其中球蛋白含量是一項非常重要的指標,血清中球蛋白主要是抗體,球蛋白含量越低血清質(zhì)量越高。血紅蛋白也是越低越好。

      微生物檢測:包括細菌、真菌、支原體、病毒等。特別是對支原體、病毒的檢測,支原體是一種很小的微生物,可通過(guò)孔徑22u的濾膜。支原體、病毒污染在光學(xué)顯微鏡下難于察覺(jué),細胞也能生長(cháng)繁殖,但會(huì )影響實(shí)驗結果。檢測支原體的方法很多,如培養法、PCR法、熒光染色法、電鏡觀(guān)察法等。

      促生長(cháng)效果:這是血清重要的特性之一,應當以培養的細胞來(lái)檢測。有兩種方法:克隆形成率、貼瓶率測定法和連續傳代培養法。

      (1)克隆形成率測定:一般以懸浮生長(cháng)的細胞為培養對象,按有限稀釋法做克隆化培養,將不同批號的血清配制成不同濃度的培養基,細胞也稀釋成不同濃度,接種到96孔板,每孔200ul,培養一定時(shí)間,統計有克隆生長(cháng)的孔,計算出百分比,再與對照的標準血清相比較,就可看出不同批號血清間的區別。比較低的濃度,更能觀(guān)察出血清質(zhì)量間的細微差別。

      (2)貼瓶率測定:是以貼壁細胞為培養對象,將細胞稀釋至低密度,接種至平皿,每皿200或100個(gè)細胞,以不同濃度的血清培養基培養,培養一定時(shí)間后棄培養基,染色后統計集落數,計算出集落數占接種細胞數的百分比,同樣再與標準血清比較,判斷血清質(zhì)量高低。

      (3)連續傳代培養法:是將細胞培養于3個(gè)一定體積的培養瓶中,待測血清配制為5%濃度,一般于第七天收集細胞,計數,取平均值,中間可以更換一次培養基。連續測試三個(gè)周期以上,觀(guān)察細胞生長(cháng)狀況,并將每次的計數結果與標準血清的測試結果比較。

      對于使用者,判斷血清質(zhì)量先從外觀(guān)入手。好的血清應該是透明清亮,土黃色或棕黃色,無(wú)沉淀或極少沉淀,比較粘稠。如發(fā)現血清渾濁、不透明、含許多沉淀物,說(shuō)明血清污染或血清中的蛋白質(zhì)變性;若血清呈棕紅色,說(shuō)明血清中的血紅蛋白含量太高,取材時(shí)有溶血現象;如果搖晃時(shí)感覺(jué)液體稀薄,說(shuō)明血清中摻入的生理鹽水太多。如果要進(jìn)一步了解血清的質(zhì)量,則應連續培養某些細胞,觀(guān)察細胞生長(cháng)狀況。

      科研實(shí)驗中,細胞的體外培養一直是一個(gè)重要環(huán)節。細胞要養好,就要用好血清,如Ausbian®特級胎牛血清,它適合各種細胞培養,尤其適合難養細胞,如:干細胞、肝細胞,神經(jīng)細胞,原代培養、細胞融合、轉染細胞等。

      Ausbian®特級胎牛血清所有血清出廠(chǎng)前,均經(jīng)過(guò)嚴格質(zhì)控,每個(gè)批次附有詳細完整的《檢測報告》,包括:品名,貨號,批號,血源地,生產(chǎn)日期,保質(zhì)期,pH值、滲透壓、血紅蛋白、總蛋白、球蛋白、IgG、內毒素、無(wú)菌檢查(細菌、真菌、支原體)、病毒檢查(如BVD、牛腺病毒、細胞病變效應等)、促細胞生長(cháng)能力、細胞毒性、BVD-1/2抗體檢查等。

      實(shí)驗人對于新批次血清,應認真審閱《檢測報告》,做好試用前篩選第一步。(如何看懂《檢測報告》,可登陸“締一生物"網(wǎng)站,留言技術(shù)部,得到免費幫助。)

      它在國內市場(chǎng)經(jīng)歷十幾年,被眾多科研工業(yè)客戶(hù)反復選擇,也是細胞典藏等重大項目十幾年的供應品牌


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