細胞培養過(guò)程中的血清沉淀
在日常實(shí)驗過(guò)程中,一些同學(xué)或多或少都會(huì )遇到血清出現沉淀的情況。那么問(wèn)題來(lái)了:
血清中的沉淀是什么?
這些沉淀是如何產(chǎn)生的?
沉淀對細胞培養會(huì )造成影響嗎?
如何減少血清沉淀?
如果你也關(guān)心這些問(wèn)題,那就跟著(zhù)我們一起,來(lái)到今天的血清科普小課堂吧,幫你一篇理清血清沉淀的各種問(wèn)題!
細胞培養中
血清沉淀從何而來(lái)?
一般來(lái)說(shuō),血清沉淀的成分可以簡(jiǎn)單分為以下幾種:
1、纖維蛋白:常見(jiàn)的體積比較大的沉淀物,達 1-2mm,肉眼可見(jiàn)。因為一些血清在收集和快速處理過(guò)程中,存在纖維蛋白原(可溶性的形成絮狀纖維蛋白的前體),處于溶解狀態(tài),但經(jīng)過(guò)濾分裝后,就會(huì )在瓶中凝結出現纖維蛋白的沉淀。
2、磷酸鈣:會(huì )使血清出現渾濁的一種沉淀物,并且在 37℃ 培養時(shí)出現增加。這類(lèi)沉淀物鏡下觀(guān)察是一個(gè)小黑點(diǎn),由于布朗運動(dòng),它們看上去仿佛可以運動(dòng),因此常被誤認為是微生物污染。
3、膽固醇、脂肪酸酯以及一些蛋白質(zhì):也是血清中出現沉淀物的常見(jiàn)原因。
細胞培養中
血清沉淀有何影響?
血清沉淀會(huì )影響細胞生長(cháng)嗎?
一般情況下,沉淀物不會(huì )影響細胞培養,但如果細胞對于營(yíng)養物質(zhì)有特殊需求,沉淀物中的成分不能被細胞吸收,可能會(huì )引起細胞長(cháng)勢較差。
血清沉淀會(huì )影響細胞實(shí)驗嗎?
會(huì )影響血清過(guò)濾。一些特殊實(shí)驗中,需要對細胞培養基進(jìn)行過(guò)濾,如果血清中出現大量的沉淀物,混入培養基中,會(huì )導致過(guò)濾孔被堵塞,影響過(guò)濾效果。
血清沉淀導致細胞污染嗎?
一般情況下,正常的沉淀物不會(huì )導致細胞污染。
但多數情況下,血清沉淀會(huì )對我們判斷細胞是否出現污染造成困擾。
絮狀沉淀容易和真菌、細菌混淆;磷酸鈣沉淀引起的小黑點(diǎn)容易與支原體污染混淆。
細胞培養中
血清沉淀從何而來(lái)?
剛出廠(chǎng)的血清,應該是澄清透明的,為了保證品質(zhì),血清會(huì )儲存在-20℃的環(huán)境中。如果運輸過(guò)程中,出現了溫度忽高忽低,反復凍融的情況,就容易析出大量沉淀。
另外,不正確的解凍方法也會(huì )引起血清產(chǎn)生大量沉淀。
細胞培養中
如何減少血清沉淀?
1、正確的運輸溫度:運輸過(guò)程中,要嚴格-20℃低溫,避免反復凍融。
2、使用正確的融化方法:在使用時(shí),正確的解凍方法也很重要,這里推薦使用國際上通用的“三步法”解凍。
需要注意的是,如果血清是儲存在-80℃冰箱中,正式解凍前應先轉移至-20℃冰箱中過(guò)渡。
一次解凍后,分裝至無(wú)菌離心管中,盡量保證每管是一次的用量,分裝管解凍也遵循三步法,解凍后需全部用完。
3、使用正確的儲存方式:長(cháng)期儲存在 2-8℃或在室溫下放置時(shí)間過(guò)長(cháng),都會(huì )引起沉淀,建議配制好的*培養基在4℃冰箱中存放不要超過(guò)7天,血清分裝好后-20℃儲存。
4、特殊的處理:γ射線(xiàn)照射與熱滅活也容易引起沉淀析出,因此要注意射線(xiàn)照射劑量以及熱滅活方法(40℃水浴加熱20分鐘即可)。
細胞培養中
如何去除沉淀?
如果要除去血清中的沉淀,可以將血清分裝至無(wú)菌離心管中,大約400g 離心,留上清即可。由于濾膜容易被沉淀堵塞,因此不建議用過(guò)濾的方法。
血清品質(zhì)
沉淀不是檢驗血清的硬指標,但為了實(shí)驗準確、實(shí)驗美觀(guān)、實(shí)驗便利,還是應該盡量減少沉淀的產(chǎn)生。掌握正確的血清解凍、使用方法,再加上一款品質(zhì)穩定的優(yōu)秀血清,對于細胞實(shí)驗來(lái)說(shuō),至關(guān)重要。
正確的使用方法與優(yōu)質(zhì)的血清,二者缺一不可。
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