貼壁型的細胞的匯合度約為100%的時(shí)候,需進(jìn)行傳代操作。
當細胞以克隆的形式生長(cháng)時(shí),匯合度則達不到100%。對于該類(lèi)型的細胞,達到或者接近最大密度的時(shí)候,即觀(guān)察不到細胞明顯擴增時(shí),就需要進(jìn)行傳代。
接觸抑制型細胞需要在細胞長(cháng)滿(mǎn)之前傳代,避免產(chǎn)生細胞長(cháng)滿(mǎn)后接觸抑制后產(chǎn)生性狀的改變。
懸浮型的細胞必須在細胞達到最大飽和密度之前傳代,懸浮細胞傳代時(shí)只需稀釋至合適的密度,讓細胞有充足的營(yíng)養恢復到對數生長(cháng)期。
如何處理腫瘤細胞株?
了解每株細胞可能產(chǎn)生的生物危害是很難的。
強烈推薦,所有的人類(lèi)和其他靈長(cháng)類(lèi)生物的細胞在預防HIV和肝炎病毒的實(shí)驗條件下操作;
所有的操作必須在生物安全柜中操作,遵守生物安全柜使用規范;
操作過(guò)程中產(chǎn)生的廢液和廢儀器都要經(jīng)過(guò)清洗、酸處理等處理后才能丟棄。
WHO公布的《用動(dòng)物細胞體外培養生產(chǎn)生物制品規程》中的要求:
1、牛血清必須來(lái)自有文件證明無(wú)牛海綿狀腦病的牛群或國家,并應具備適當的監測系統。
2、有些國家還要求牛血清來(lái)自未用過(guò)反芻動(dòng)物蛋白飼料的牛群。
3、證明所用牛血清中不含對所生產(chǎn)疫苗病毒的抑制物。
4、血清要通過(guò)濾膜過(guò)濾除菌,保證無(wú)菌。
5、無(wú)細菌、霉菌、支原體和病毒的污染,有些國家要求無(wú)細菌噬菌體污染。
6、對細胞有良好的支持繁殖作用。
我國對牛血清的質(zhì)量中提出比較嚴格的標準要求:
包括蛋白質(zhì)含量,細菌、真菌、支原體、牛病毒、大腸桿菌噬菌體、細菌內毒素,支持細胞增殖檢查。一款來(lái)自澳洲的Ausbian®胎牛血清在市場(chǎng)上頗受歡迎。它具有精選內毒素極低、產(chǎn)量充足的血清批次,滿(mǎn)足干細胞、基因敲除、原代培養、細胞典藏、長(cháng)期傳代等各類(lèi)細胞的培養要求;澳洲血源,完整的檢測報告及滅病毒服務(wù),為各類(lèi)臨床相關(guān)項目的申報提供完整支持等特點(diǎn)。