一、產(chǎn)品用途:
新guan病毒RT-qPCR引物/探針(套裝)(英文名:SARS-CoV-2 Confirm),用于定性檢測和分析新guan病毒RNA。它僅用于研究,不用于臨床診斷。
品名貨號/規格存儲
新guan病毒RT-qPCR引物/探針(套裝)
英文名:SARS-CoV-2 Confirm
品牌:德國MB公司(Minerva Biolabs)271-2100
100個(gè)反應/盒2-8℃避光。
凍干粉復溶后在-18℃以下保存
二、產(chǎn)品描述:
1. 該產(chǎn)品包括三個(gè)小管:
?、俪壬w: 2019-n CoV Mix(凍干粉),1管。
此管為新guan病毒引物/探針,可特異性擴增新guan病毒的RdRp基因(即RNA依賴(lài)性RNA聚合酶基因),而其他冠狀病毒RNA不會(huì )被檢測到【1】【2】。(該引物/探針依據WHO診斷參考實(shí)驗室公布的新guan病毒引物/探針序 列而設計【1】。更多詳情可訪(fǎng)問(wèn):
如要檢測其他冠狀病毒,推薦MB公司提供的其他冠狀病毒引物/探針,品名:CoV Screen (without ConviFlex™RT-Taq Mix),貨號:271-1100。
?、诰G蓋:Positive Control RNA(陽(yáng)性對照RNA,凍干粉),1管。
此陽(yáng)性對照RNA為一段合成的RNA序列(序列來(lái)自武漢的病毒株)。
?、郯咨w:PCR Grade Water(液體),1管。
2.使用前,①橙蓋和②綠蓋先用PCR級水(③白蓋)復溶,并分裝,避免反復凍融。
3.該引物/探針應與MB公司提供的【RNA病毒檢測試劑盒】(英文名:ConviFlex™RT-Taq Mix,貨號192-0025/-0100/-0250)一起使用,用于新guan病毒RT-qPCR反應檢測。
4.檢測樣本需為抽提過(guò)的RNA樣本。
5.新guan病毒的靶基因RdRp是用FAM™通道檢測,擴增的人RNA酶P基因(過(guò)程對照)用ROX™通道檢測,用以評估樣本的制備質(zhì)量。
三、產(chǎn)品特點(diǎn):
1. 靶點(diǎn)特別。依據WHO國際標準,此引物探針為新guan病毒RdRp基因,而非市面上常見(jiàn)的ORF1ab和N基因或E基因。
2.陽(yáng)性對照RNA為一段合成的RNA序列。
3. 主要組分為凍干粉,4℃保存,儲存運輸方便,性能穩定。
4. 適用于科研中,各種來(lái)源的RNA樣本,包括拭子、活檢組織、哺乳動(dòng)物細胞和細菌等。
四、需用戶(hù)自己準備的試劑耗材和儀器:
1. RNA病毒檢測試劑盒(RT-qPCR法)(英文名:ConviFlex™ RT-Taq Mix,貨號192-0025/-0100/-0250)
2. 熒光定量PCR儀(qPCR儀)
3. 無(wú)DNase和RNase的qPCR反應管
4. 離心機
5. 移液器及帶濾芯吸頭(不含DNase和RNase)
6. 用戶(hù)自己提取的RNA或現成的RNA樣品。(抽提過(guò)程建議使用商品化的RNA提取試劑盒完成,如MB廠(chǎng)家的:【病毒RNA提取試劑盒】(ExtractNow™ Virus RNA Kit,貨號611-1010/-1050/-1250)或【病毒RNA拭子提取試劑盒】(ExtractNow™ Virus RNA Swab Kit,貨號611-2250)。
五、操作注意事項:
1. 該引物/探針應僅由經(jīng)過(guò)培訓的實(shí)驗室人員使用。
2. 始終穿上合適的防護服和戴一次性手套。
3. 根據樣品類(lèi)型,應謹慎處理所有樣品。
4. 請遵循WHO推薦的方法處理樣本。
5. 該試劑盒不含有害物質(zhì)。殘余物可以根據當地法規丟棄。
六、操作步驟:
步驟1. 試劑制備:包括試劑溶解等預處理步驟
步驟2. RT-qPCR引物/探針mix制備
步驟3. 設置qPCR程序
步驟4. 啟動(dòng)程序
步驟5. 數據解讀
FAM™ 通道ROX™ 通道 說(shuō)明
陽(yáng)性陽(yáng)性檢測到SARS-CoV-2 RNA
陽(yáng)性陰性檢測到SARS-CoV-2 RNA
陰性陽(yáng)性未檢測到SARS-CoV-2 RNA
陰性陰性結果無(wú)效
七、使用注意事項:
1. 使用前應認真閱讀說(shuō)明書(shū)。
2. 來(lái)自不同批次的試劑不能混合。
3. 試劑盒內的試劑應始終作為一個(gè)整體溶解分裝。
4. 試劑盒應在效期內使用。
5. 每次PCR至少應設置一個(gè)陽(yáng)性對照。每次PCR至少應設置一個(gè)陰性對照和/或一個(gè)無(wú)模板對照。
6. 建議在無(wú)RNA和DNA污染的條件下進(jìn)行RT-PCR,以避免操作過(guò)程中DNA或非特異RNA的交叉污染。(MB公司推薦使用PCR污染祛除噴霧,英文名:PCR Clean™,貨號15-2025,預先清潔實(shí)驗環(huán)境。)
7. 盡量減少RNA樣品的凍融次數,同時(shí)避免RNA酶污染,以減少RNA降解的風(fēng)險。(RNA降解會(huì )極大地限制了RT-qPCR反應的性能)。請確保高質(zhì)量的完整RNA用于檢測。
8. 樣本制備過(guò)程中,注意避免其他DNA的污染,DNA的干擾也會(huì )降低qPCR的準確性。