400-166-8600
常規PCR法介紹
常規PCR法：是根據支原體核糖體16s-23s rRNA的特異保守序列設計引物，對待檢樣本DNA進(jìn)行擴增，通過(guò)對擴增產(chǎn)物的大小分析作出診斷。
優(yōu)點(diǎn)：①靈敏度高，特異性好。②時(shí)間短，2-3小時(shí)出結果。③符合歐洲藥典。④操作簡(jiǎn)單。
缺點(diǎn)：①對于已做支原體滅活處理的樣品，由于支原體DNA仍舊存在其中，PCR結果會(huì )出現假陽(yáng)性。（可用培養法做補充驗證）。②不同廠(chǎng)家生產(chǎn)的試劑盒質(zhì)量差異巨大（由于引物及內在設計不同），需謹慎選擇，盡量在專(zhuān)業(yè)人員推薦指導下使用。
『支原體常規PCR檢測試劑盒』介紹
德國MB公司生產(chǎn)的支原體常規PCR檢測試劑盒，依據操作步驟的細微差別，分一步法和經(jīng)典法兩類(lèi)。此兩類(lèi)試劑盒較其他廠(chǎng)家同類(lèi)產(chǎn)品，具有以下的優(yōu)點(diǎn)：
①高特異性，270bp左右的一條陽(yáng)性對照條帶，涵蓋了所有可能感染細胞的支原體物種，操作簡(jiǎn)單，結果易于觀(guān)察。（使用MB的試劑盒，下表列出的支原體物種均為陽(yáng)性，其他微生物或真核細胞均為陰性。根據16s rRNA序列的同源性比對，該試劑盒可檢測出1種脲原體、7種無(wú)膽甾原體和85種支原體。）
②高靈敏度，1-5拷貝/μl的支原體DNA即可檢出。
③試劑盒含內控對照，可防止假陰性的發(fā)生。
④符合歐洲藥典要求。
適用范圍
<!--[if !supportLists]-->A. <!--[endif]-->科研用戶(hù)，細胞上清的篩查可選用MB公司生產(chǎn)的支原體常規PCR檢測試劑盒（一步法）。（詳見(jiàn)下文）
【Venor® Gem OneStep (貨號:11-8050)】或【Venor® Gem Advance (貨號: 11-7096)】
B. 對于需遵循藥典要求的生物制藥企業(yè)，可選用MB公司生產(chǎn)的支原體常規PCR檢測試劑盒（經(jīng)典法）。
【Venor® Gem Classic(貨號: 11-1050) 】+ Taq酶 (貨號: 53-1050)】
或【Venor® Gem Classic (貨號: 11-1050G)】
特點(diǎn)
1. 內控對照已加在預混液中，無(wú)需另外配置，使用便捷。
2.高特異性，僅一條陽(yáng)性對照條帶，即可涵蓋所有可能感染細胞的支原體物種。
操作簡(jiǎn)單，易于觀(guān)察。
3.高靈敏度，1-5拷貝/μl的支原體DNA即可檢出。
4.歐洲藥典要求的26種支原體均可檢出。該試劑盒可檢測出1種脲原體、7種無(wú)膽甾原體和85種支原體。
操作步驟
下列圖示以Venor® Gem OneStep支原體常規PCR檢測試劑盒(一步法)( 貨號：11-8050) 為例，具體產(chǎn)品操作以說(shuō)明書(shū)為準。
191bp為內控對照條帶，表明PCR反應正常。
當樣本存在支原體污染時(shí)，由于內控對照與支原體DNA存在競爭，內控對照條帶變弱（例如支原體DNA＞103拷貝）。
陽(yáng)性對照中支原體DNA＞104拷貝，內控對照條帶會(huì )完QUAN消失。
可能在80-90bp存在引物自退火形成的條帶，此條帶不影響檢測結果。
如果待測樣本對PCR產(chǎn)生抑制，則內控對照條帶變弱（和陰性對照相比），此時(shí)應先進(jìn)行DNA抽提（推薦使用：Venor® Gem Sample Preparation Kit 支原體DNA抽提試劑盒），然后再檢測。
儲存條件
2~8℃至少12個(gè)月。復溶后必須在-18℃保存。
效期
1年6個(gè)月
(締一生物)
本網(wǎng)站所有注明“來(lái)源：締一生物”的文字、圖片和音視頻資料，版權均屬于北京締一生物網(wǎng)站所有。非經(jīng)授權，任何媒體、網(wǎng)站或個(gè)人不得轉載，否則將追究法律責任。取得書(shū)面授權轉載時(shí)，須注明“來(lái)源：締一生物”。
當前位置：