細胞培養的開(kāi)始,就是復蘇細胞。如何有條不紊地讓細胞從沉睡中蘇醒?今天就來(lái)給大家總結幾個(gè)實(shí)用小技巧,快點(diǎn)來(lái)get!
細胞復蘇流程:
1、將凍存的細胞從液氮罐中取出,立即放入37°C的水浴中進(jìn)行融化,輕柔晃動(dòng),加速融化,直到小瓶中只剩下一小塊冰,時(shí)長(cháng)應控制在1min中;
2、用70%乙醇擦拭瓶外后轉移無(wú)菌操作臺中,打開(kāi)瓶蓋前,用酒精燈火焰對瓶口進(jìn)行消毒;
3、將預加熱的新鮮完quan培養基滴入小瓶中。緩慢用移液槍吸取瓶中液體至15ml離心管中,加入適量濃度和體積的完quan培養基,輕柔混合均勻;
4、200 × g左右細胞懸浮液離心5-10分鐘。實(shí)際的離心速度和持續時(shí)間因細胞類(lèi)型而異。棄掉上清,加入新鮮完quan培養基重懸細胞,并將其轉移到適當的培養容器和推薦的培養環(huán)境中。
細胞解凍流程圖
注意事項:
1、液氮溫度低,小心低溫對人造成的傷害,在液相中儲存的冷凍瓶在解凍時(shí)存在爆炸的風(fēng)險,因此,取出凍存管的時(shí)候,要做好個(gè)人防護。
2、通常細胞集中儲藏在液氮中,取出時(shí)應迅速,避免溫差對其他凍存細胞造成影響。
3、復蘇細胞的核心技術(shù),簡(jiǎn)而言之就是快融,將在37°C水浴中快速解凍冷凍細胞(< 1分鐘)。
4、解凍時(shí),凍存管先放入無(wú)菌一次性PE手套中,再放入水中融化,避免污染也方便操作。
5、用預熱過(guò)的培養基慢慢稀釋解凍的細胞。
6、解凍細胞后,在培養皿中培養時(shí),應盡量維持高密度,以提高細胞存活率。
7、注意無(wú)菌操作,避免細胞發(fā)生污染。
細胞高效解凍的另一個(gè)成功秘訣,就是選擇一款優(yōu)質(zhì)血清!
Ausbian進(jìn)口特級胎牛血清,有以下優(yōu)點(diǎn),可以盡可能幫助實(shí)驗者提高細胞實(shí)驗成功率:
1. 精選內毒素更低批次(≤3EU/ml)。是細胞典藏等重大項目十幾年的穩定供應品牌。
實(shí)驗室有些細胞,需要長(cháng)期培養、長(cháng)期凍存,或者經(jīng)常復蘇、經(jīng)常培養的,血清會(huì )經(jīng)?;蜷L(cháng)時(shí)間作用于細胞。為保證細胞的健康,都應該選用更低內毒素的血清,以避免內毒素長(cháng)久對細胞的毒性影響。
2. 新批次在試用前,提供試用服務(wù),養細胞更放心。
3. 每個(gè)批次產(chǎn)量800-2000升,試用滿(mǎn)意的實(shí)驗室批號優(yōu)先鎖定,保證大多數項目?jì)赡瓴恍钃Q批次,細胞試驗數據穩定。
4. 每年按廠(chǎng)家生產(chǎn)順序,會(huì )有多批次平行供應,每個(gè)實(shí)驗室專(zhuān)屬批號管理,保證供貨穩定。
5. 為Ausbian血清用戶(hù)免費提供申報支持,具有完整的檢測報告,為各類(lèi)項目的申報提供支持(同時(shí)為血清VIP用戶(hù)在支原體檢測、方法學(xué)驗證等方面,提供更多免費延伸性技術(shù)幫助)。
6. 針對特殊科研項目,可提供3-5個(gè)平行批次,讓試驗人有更多選擇空間。
7. 為Ausbian血清提供免費代儲存服務(wù),為儲存空間不足的實(shí)驗室提供可靠的血清倉儲保護,按要求隨時(shí)發(fā)貨。
8. Ausbian血清從出廠(chǎng),到實(shí)驗室,全程低溫冷鏈保護,確保血清無(wú)反復凍融。
9. 免費真品保障,每個(gè)血清瓶身加貼Viansaga®易破損防偽標簽,Ausbian品牌真品保護,逢假必究,為實(shí)驗室做好售后保障。
10. 免費無(wú)憂(yōu)售后,所有實(shí)驗室簽收的Ausbian胎牛血清,從簽收日開(kāi)始計算,一年之內,血清在妥善保管、未開(kāi)封未融化、且不影響二次銷(xiāo)售的情況下,均可享受無(wú)條件退貨或換貨的售后保障。
11. 免費專(zhuān)業(yè)幫助,匯集近二十年,千萬(wàn)個(gè)血清用戶(hù)細胞培養經(jīng)驗,為各種細胞培養提供問(wèn)題梳理分析,解決方案參考。