目前在市場(chǎng)上,有一款支原體qPCR檢測試劑盒(英文品名:Venor®Gem qEP,廠(chǎng)家:德國MB) 廣受藥廠(chǎng)的歡迎。
該試劑盒經(jīng)過(guò)全面的方法學(xué)驗證,符合歐洲藥典和日本藥典要求,適合細胞治療、CAR-T、抗體藥、疫苗等藥廠(chǎng)的過(guò)程控制、放行檢測以及臨床申報。要用好該試劑盒,除了嚴格遵循說(shuō)明書(shū)的操作外,還有些注意事項,下面小編向您介紹一下。
一、儀器的設置
要注意你所用的qPCR儀有幾個(gè)通道,是否可檢測相應的熒光素。
MB的支原體qPCR檢測試劑盒(英文名:Venor®Gem qEP)適用的熒光定量PCR儀的機型廣泛,相關(guān)設置可從締一生物網(wǎng)站下載。
二、基線(xiàn)設置
許多qPCR儀軟件有自動(dòng)基線(xiàn)設置功能。
但要注意,有時(shí)也需要查看原始熒光數據,了解各個(gè)樣本的基線(xiàn)水平。
如下圖圖1,有一些樣本的基線(xiàn)水平較高,就提示這些樣本可能存在一定的數據偏差或操作錯誤。
圖1. 基線(xiàn)校正前的曲線(xiàn)
三、閾值設置
許多qPCR儀軟件有自動(dòng)閾值設置功能。但也應關(guān)注一下,儀器自動(dòng)設定的閾值線(xiàn)是否合適。這需要一定的經(jīng)驗。
如果閾值設定太低,會(huì )使靈敏度**化,增加假陽(yáng)性的可能;
如果閾值設定太高,可能會(huì )影響靈敏度并導致假陰性。
圖2和圖3就是一個(gè)例子。
圖2. ABI 7500自動(dòng)閾值的設定。
圖3. ABI 7500手動(dòng)閾值的設定(熒光**值的5%)
在圖2中,有2個(gè)樣本為支原體陽(yáng)性(黃線(xiàn)和紅線(xiàn))。
在圖3中,這2個(gè)樣本中有一個(gè)變?yōu)殛幮粤耍t線(xiàn))。
總之,閾值設定,如果是軟件自動(dòng)設置,應再看一下閾值線(xiàn)的位置是否合適。必要時(shí)可進(jìn)行手動(dòng)設置。