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隨著(zhù)細胞生物學(xué)的發(fā)展，細胞增殖過(guò)程的奧秘被逐步揭開(kāi)。而牛血清制備技術(shù)的不斷革新，也在一定程度上助力細胞生物學(xué)的發(fā)展。新生牛血清是一類(lèi)比較常見(jiàn)的牛血清，營(yíng)養成分的豐富度雖不及胎牛血清，但優(yōu)質(zhì)的新生牛血清，仍然足以供給大部分細胞的生長(cháng)繁殖。Ausbian進(jìn)口新生牛血清，富含各類(lèi)營(yíng)養成分，內毒素含量低。
測量體內細胞增殖對我們理解器官發(fā)育、疾病和組織再生具有重要意義。揭示不同細胞類(lèi)型的增殖動(dòng)力學(xué)對于尋找新的疾病治療方法和提供組織再生的新視角也十分重要。檢測細胞增殖的成熟方法包括對組織切片上的增殖標記物進(jìn)行免疫染色，在新合成的DNA中加入DNA類(lèi)似物，以及在細胞周期中通過(guò)合成代謝檢測合并的同位素。
然而，目前追蹤細胞增殖的方法的局限性在不同的生命科學(xué)領(lǐng)域留下了許多未解決的問(wèn)題。
首先，增殖標記物的免疫染色只能提供細胞增殖的快照，使得檢測罕見(jiàn)的增殖細胞在技術(shù)上具有挑戰性。其次，目前的檢測方法不能提供直接的細胞類(lèi)型特異性增殖信息。這是一個(gè)重要的問(wèn)題，特別是對于那些只有較差染色譜系標記與增殖標記共同免疫染色的細胞類(lèi)型。它對于被其他更頻繁分裂的細胞包圍的很少增殖的細胞類(lèi)型也很重要，其中需要譜系信息來(lái)增加信號與背景比。
另外，可以評估純化后細胞增殖的方法(例如FACS)將能夠研究細胞類(lèi)型特異性更新，盡管它們失去了原位增殖信息。生命科學(xué)中的許多爭議可以通過(guò)建立新的增殖檢測方法來(lái)解決，包括肝穩態(tài)和肝損傷后的肝細胞再生。
譜系追蹤可用于測量活體細胞的增殖，并且根據報告小鼠系的選擇，它可以用細胞質(zhì)或核信號標記細胞。在體內追蹤細胞命運廣泛使用的技術(shù)是cre - loxp介導的遺傳譜系追蹤。在這種方法中，Cre重組酶由特定基因的表達調控元件驅動(dòng)，去除報告基因等位基因中loxp -側翼的轉錄停止盒，從而產(chǎn)生報告基因的表達(例如GFP或tdTomato)。人雌激素受體可以與Cre重組酶融合，使Cre活性被他莫昔芬誘導。Ki67的啟動(dòng)子(一種廣泛使用的細胞增殖標記物)已被用來(lái)驅動(dòng)CreER在他莫昔芬給藥后追蹤Ki67+心肌細胞。然而，Ki67-IRES-CreER捕獲的增殖心肌細胞百分比遠低于同種型合并捕獲的心肌細胞百分比。這可能是因為他莫昔芬誘導的Cre活性只能持續12-24小時(shí)，因為他莫昔芬的血清半衰期。此外，當他莫昔芬治療與Ki67啟動(dòng)子活性不同步時(shí)，Ki67- ires - creer無(wú)法捕獲增殖信號。因此，隨著(zhù)時(shí)間的推移，無(wú)縫捕獲Ki67+細胞是一項技術(shù)挑戰，因為連續重復的他莫昔芬治療既麻煩又有害。
近日，研究人員開(kāi)發(fā)了了一種檢測細胞增殖的遺傳方法:使用遺傳譜系追蹤技術(shù)以組織特異性的方式實(shí)現體內細胞增殖的無(wú)縫記錄。該研究提供了一個(gè)詳細的方案(小鼠系的產(chǎn)生，小鼠系的表征，小鼠系雜交和細胞增殖追蹤)，用于使用該遺傳系統研究細胞增殖。
這種細胞增殖追蹤系統，我們稱(chēng)之為“ProTracer"(增殖追蹤器)，允許對活體動(dòng)物中特定細胞系的細胞增殖進(jìn)行終身無(wú)創(chuàng )監測。與其他需要處死動(dòng)物的短期策略相比，ProTracer不需要采樣或犧牲動(dòng)物進(jìn)行組織處理。為了突出這些特征，研究人員使用ProTracer研究了小鼠肝臟穩態(tài)和組織損傷后肝細胞的增殖。技術(shù)實(shí)現了多個(gè)方面的突破，包括在體內長(cháng)時(shí)間不間斷地示蹤細胞增殖，實(shí)現了細胞類(lèi)型特異性的細胞增殖檢測以及活體檢測細胞增殖等。
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