臨床醫學(xué)中的許多常見(jiàn)檢測手段,都源自于生物學(xué)研究。我們常見(jiàn)的病毒檢測,就利用了RT-PCR技術(shù)。德國Minerva Biolabs的RT-PCR引物/探針(英文名:SARS-CoV-2 Confirm),用于定性檢測和分析病毒RNA。它僅用于研究,不用于臨床診斷。
RT-PCR(逆轉錄聚合酶鏈反應,Reverse Transcription Polymerase Chain Reaction)是一種常用的分子生物學(xué)技術(shù),用于在實(shí)驗室中檢測和擴增RNA分子的特定序列。
RT-PCR結合了兩種基本的技術(shù):逆轉錄和聚合酶鏈反應。逆轉錄是將RNA轉錄成DNA的過(guò)程,利用一種特殊的酶稱(chēng)為逆轉錄酶(reverse transcriptase)。逆轉錄酶能夠將RNA作為模板,合成與其相對應的DNA,這個(gè)DNA稱(chēng)為互補DNA或cDNA。逆轉錄的結果是將RNA分子轉化為DNA分子,這樣就可以使用PCR技術(shù)來(lái)擴增目標DNA序列。
在RT-PCR中,逆轉錄酶首先與RNA模板結合,利用RNA上的引物(primer)引導合成cDNA鏈。然后,PCR反應的第二個(gè)階段開(kāi)始,其中使用DNA聚合酶(DNA polymerase)和一對DNA引物來(lái)擴增目標DNA序列。PCR通過(guò)多次循環(huán)的溫度變化,使DNA鏈的兩個(gè)末端的引物與DNA模板的特定區域結合,并在每個(gè)循環(huán)中合成新的DNA鏈。這樣,目標序列就被指數級地擴增了。
RT-PCR在分子生物學(xué)和醫學(xué)研究中具有廣泛的應用。它可以用于檢測和定量RNA分子的表達水平,例如研究特定基因的表達模式、分析病毒感染的程度等。此外,RT-PCR還常用于檢測和診斷病原體的存在,例如檢測病毒、細菌等引起感染的微生物。
在RT-PCR(逆轉錄聚合酶鏈反應)中,引物(primers)是起關(guān)鍵作用的短DNA片段,用于識別和定向擴增目標RNA序列轉錄的互補DNA(cDNA)。
引物通常由兩個(gè)部分組成:前向引物(forward primer)和反向引物(reverse primer)。這兩個(gè)引物的序列是針對目標RNA序列的互補序列設計的,以確保引物與目標序列的特定區域配對。引物的設計需要考慮到幾個(gè)因素,如引物長(cháng)度、堿基組成、GC含量、互補性等。