實(shí)驗室中,如何快速檢測RNA病毒?德國MB生產(chǎn)的ConviFlex™RT-Taq Mix是一種凍干通用RT-PCR主混合物,專(zhuān)為RNA分子的定性檢測和分析而設計,特別適用于RNA病毒的檢測。
ConviFlex™RT-Taq Mix是一種即用型一步RT-PCR試劑盒,包含MuLV逆轉錄酶,熱啟動(dòng)Taq聚合酶和dNTPs在凍干主混合物中。用隨附的2倍補液緩沖液重組后,ConviFlex™RT-Taq Mix包含RT-PCR擴增所需的所有核心成分。
除了RNA模板和引物。這可以大大減少設置RT-PCR反應所需的移液步驟,動(dòng)手時(shí)間和交叉污染的風(fēng)險。
ConviFlex™RT-PCR Mix中包含的Taq聚合酶具有熱啟動(dòng)功能。即使在環(huán)境溫度下,其活性也會(huì )在PCR過(guò)程中被抗taq DNA聚合酶抗體阻斷。當溫度升高到70℃以上時(shí),這種抑制作用在變性過(guò)程中被逆轉,導致Taq聚合酶被激活。因此,非特異性PCR產(chǎn)物和引物二聚體的形成被強烈抑制,導致PCR反應具有更高的特異性、更高的靈敏度和更高的產(chǎn)量?;旌衔镏邪哪孓D錄酶是一種轉基因的小鼠白血病病毒(M-MuLV)。ConviFlex™RT-PCR Mix可以很容易地適應大多數RT-PCR協(xié)議,程序和循環(huán)器類(lèi)型。因此,本文檔中的RT-PCR設置和協(xié)議僅是RT-PCR系統的建議。最佳體積、濃度、溫度和孵育時(shí)間可能因您的具體應用而有很大差異,應根據您自己的分析要求進(jìn)行調整。
ConviFlex™RT-Taq Mix可用于真核、原核、病毒RNA和體外轉錄RNA的反轉錄和PCR擴增。使用市售的RNA提取試劑盒(參見(jiàn)ExtractNow™RNA Mini kit Cat),可以從組織、拭子和活組織、哺乳動(dòng)物細胞和細菌等不同的起始材料中提取RNA。No. 603-1050或ExtractNow™病毒RNA Kit Cat編號611-1010/-1050/-1250)或建立良好的提取方法。RNA制備必須不含RT-PCR抑制劑,如有機溶劑等。提取的RNA的降解極大地限制了RT-PCR反應的性能。盡量減少RNA樣品或RNA酶污染的凍融循環(huán)次數有助于防止RNA降解。DNA污染也會(huì )降低RT-PCR的產(chǎn)率。