細胞體外培養技術(shù)的應用,是人類(lèi)開(kāi)啟生命奧秘大門(mén)的鑰匙。該項技術(shù)的發(fā)展,科學(xué)家們能夠脫離供體的情況下,在實(shí)驗室中,研究并分析各種細胞的生命活動(dòng)。高效的細胞培養來(lái)之不易,操作過(guò)程的實(shí)際情況十分復雜,存在諸多可能會(huì )影響培養效率的因素,包括實(shí)驗環(huán)境、實(shí)驗材料的選擇等。
一、實(shí)驗環(huán)境
細胞培養環(huán)境需要嚴格無(wú)菌,甚至是空氣都要使用新風(fēng)系統進(jìn)行過(guò)濾。對于墻壁、地板、桌面、超凈工作臺,更是要定期清潔。德國Minerva Biolabs公司的Mycoplasma-off™ Wipes和Mycoplasma-off™直接用于實(shí)驗環(huán)境、物品、儀器、設備的清潔。該試劑無(wú)需稀釋?zhuān)瑖姙⒒虿潦煤笞匀伙L(fēng)干,即可高效清除環(huán)境中的微生物污染。
細胞培養環(huán)境中,培養箱水槽,水浴鍋經(jīng)常會(huì )有支原體以及各種細菌、霉菌滋生,稍有不慎或清洗不及時(shí),水槽中的水源即會(huì )成為細胞污染的重要來(lái)源。保持水槽的潔凈,對細胞培養的順利進(jìn)行非常重要。推薦:全球眾多實(shí)驗室日常都在使用德國MB公司生產(chǎn)的Water Shield™支原體污染防護劑(水槽用)。Water Shield™可持續作用四周,使水源避免受到支原體、細菌、真菌、霉菌、孢子的污染。按1:200的比例,加到水浴鍋或培養箱水盤(pán)的無(wú)菌水中即可
二、實(shí)驗材料的選擇
所培養的細胞,來(lái)源應清晰,確保無(wú)污染。對于培養試劑及耗材,也盡可能選擇無(wú)菌的。
細胞離不開(kāi)高品質(zhì)血清。而胎牛血清作為天然的培養基,在培養實(shí)驗中占有重要位置。選擇胎牛血清的重要指標之一,就是考察內毒素的含量。
內毒素在細胞傳代增殖過(guò)程中,會(huì )直接參與細胞凋亡的過(guò)程,一定劑量下,會(huì )給細胞培養帶來(lái)很多問(wèn)題,特別是免疫細胞和干細胞,例如:誘導免疫細胞釋放炎癥因子,抑制小鼠紅細胞集落的形成等。因此,血清中內毒素含量越低,對細胞毒性越小,越利于細胞的生長(cháng)和傳代;反之,內毒素含量過(guò)高,會(huì )直接導致細胞狀態(tài)不良,提前老化,甚至死亡。
基于以上研究,用于細胞培養的牛血清,要通過(guò)嚴格的內毒素水平檢測,每一批血清都有完整的檢測報告,通過(guò)內毒素的檢測數值,對血清的品質(zhì)進(jìn)行分級和評估。
目前國際通用的分級方法,均以?xún)榷舅睾康母叩蛠?lái)確定,內毒素含量越低,血清的級別就越高,以胎牛血清為例:
當血清中內毒素含量≤10EU/ml時(shí),此血清為特級胎牛血清;
當血清中內毒素含量﹥10EU/ml,≤ 25EU/ml時(shí),此血清為優(yōu)級胎牛血清;
當血清中內毒素含量≥25EU/ml時(shí),此血清為標準級胎牛血清;
Ausbian®進(jìn)口特級胎牛血清,澳洲血源,均經(jīng)過(guò)嚴格篩選, 目前所有批次內毒素都低于3EU/ml,其中有的批次可以低至≤1EU/ml。更低的內毒素血清,更利于細胞的生長(cháng)和傳代。