細胞支原體污染是細胞培養過(guò)程中常見(jiàn)的一種污染問(wèn)題。支原體是一類(lèi)微生物,以細胞內寄生的方式存在,可以感染多種細胞類(lèi)型,對細胞培養和實(shí)驗結果產(chǎn)生嚴重影響。
細胞支原體污染原因:
1.源頭污染:細胞培養實(shí)驗室中使用的細胞系或原代細胞可能攜帶有支原體,如果沒(méi)有經(jīng)過(guò)篩查和消毒處理,可能會(huì )引入支原體污染。
2.實(shí)驗操作不當:如操作人員沒(méi)有穿戴合適的個(gè)人防護設備、操作臺面和器具未經(jīng)消毒、容器密封不嚴等都可能導致支原體的傳播和污染。
3.檢測和鑒定不準確:傳統的檢測方法可能無(wú)法準確鑒定細胞中的支原體,從而導致未能及時(shí)發(fā)現和處理污染。
檢測方法:
1.PCR檢測:通過(guò)擴增支原體特異性基因片段進(jìn)行檢測,具有高靈敏度和特異性,可以檢測到低濃度的支原體污染。
2.細胞培養法:將待測細胞接種至選擇性培養基中,觀(guān)察細胞形態(tài)和生長(cháng)情況,如出現細胞變形、聚集等異?,F象,可能提示存在支原體污染。
3.免疫熒光染色法:利用特異性抗體與支原體抗原結合,通過(guò)熒光顯微鏡觀(guān)察細胞中的支原體標記物,快速準確地確定支原體感染情況。
4.電子顯微鏡觀(guān)察:通過(guò)電子顯微鏡對細胞進(jìn)行觀(guān)察和分析,以發(fā)現支原體的存在和形態(tài)特征。
細胞支原體污染預防控制措施:
1.嚴格篩查源細胞:在使用細胞系或原代細胞前,對供應商提供的細胞進(jìn)行詳細的篩查和檢測,確保無(wú)支原體污染。
2.個(gè)人防護:操作細胞時(shí),操作人員應穿戴合適的個(gè)人防護設備,如實(shí)驗服、手套、口罩等,以減少污染的傳播。
3.器具消毒:實(shí)驗室的培養器具、培養皿等應經(jīng)過(guò)清洗和高溫蒸汽消毒,確保無(wú)支原體殘留。
4.環(huán)境控制:保持實(shí)驗室的空氣流通和清潔,定期對操作臺面、儀器設備進(jìn)行消毒和清潔,減少支原體的滋生和傳播。
5.定期檢測:采用敏感、快速和準確的檢測方法,定期對實(shí)驗室中的細胞系和原代細胞進(jìn)行檢測,早期發(fā)現和處理支原體污染。
6.隔離措施:對已經(jīng)檢測出支原體污染的細胞進(jìn)行隔離處理,防止其傳播給其他細胞系或實(shí)驗動(dòng)物。