胎牛血清是廣泛用于細胞培養基的重要成分,提供了多種生物活性物質(zhì),包括激素、生長(cháng)因子、脂質(zhì)、礦物質(zhì)、黏附和鋪展因子,以促進(jìn)體外細胞培養。然而,在特定研究領(lǐng)域,透析胎牛血清也被用于滿(mǎn)足研究需求。下文將從生產(chǎn)工藝和應用方面對透析胎牛血清進(jìn)行綜合介紹,以促進(jìn)相關(guān)研究和應用的進(jìn)行。
1. 透析胎牛血清的制備
a. 透析胎牛血清是基于普通胎牛血清進(jìn)行特殊處理的產(chǎn)品。在制備過(guò)程中,普通胎牛血清需要經(jīng)過(guò)嚴格的無(wú)菌處理,包括0.1微米膜三重過(guò)濾以及各項檢測,如理化性質(zhì)(如滲透壓和pH值),成分(如內毒素和血紅蛋白)以及外源因子(如細菌、病毒和支原體),以確保其質(zhì)量和安全性。
b. 透析胎牛血清的制備涉及透析過(guò)程,通過(guò)特定的透析膜在4°C下將血清透析在0.15M NaCl中。這個(gè)透析膜只允許小于10 kDa的小分子通過(guò),這些小分子在滲透壓的作用下從血清中滲析到透析膜外的NaCl溶液中。透析的終止通常是當血清中葡萄糖濃度降至<5 mg/dL時(shí),但透析過(guò)程還需要仔細監測pH值和滲透壓。
c. 透析過(guò)程采用切向流過(guò)濾,即流體與過(guò)濾方向垂直的過(guò)濾方式,以減小濾膜上的物質(zhì)堆積,確保穩定的過(guò)濾速度。
2. 透析胎牛血清的應用
透析胎牛血清主要用于特殊研究領(lǐng)域,其中需要關(guān)注小分子濃度的應用,包括以下四個(gè)領(lǐng)域,它們有時(shí)相互交叉。
a. 同位素標記技術(shù)在細胞培養中的應用。
同位素標記技術(shù),例如Stable isotope labeling with amino acids in cell culture (SILAC),是一種基于質(zhì)譜的蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)。它通過(guò)將13C或15N標記的氨基酸引入培養基,標記細胞內新合成的蛋白質(zhì),用于比較不同處理下的細胞蛋白質(zhì)豐度。透析胎牛血清可用于排除天然氨基酸的干擾,以確保標記氨基酸的準確性。
b. 工程細胞株的篩選。
例如,CHO-DFGRˉ細胞株需要在培養基中添加次黃嘌呤、胸腺嘧啶和甘氨酸才能生存。透析胎牛血清可用作選擇培養基的一部分,以幫助篩選經(jīng)過(guò)基因工程的細胞株。
c. 研究某些因子對細胞增殖和分化的影響。
透析胎牛血清可用于研究核苷酸、微量元素等對細胞的影響,以避免培養體系中的干擾物質(zhì)。