在解凍胎牛血清之前,需要做好準備工作。首先,應確保實(shí)驗室環(huán)境清潔,避免污染,可以使用紫外線(xiàn)照射無(wú)菌工作臺和實(shí)驗空間,同時(shí)配合使用實(shí)驗室微生物污染祛除類(lèi)試劑,比如德國Minerva Biolabs生產(chǎn)的Mycoplasma Off支原體祛除噴霧劑,對實(shí)驗室進(jìn)行清潔,降低胎牛血清在解凍、分裝或使用過(guò)程中被污染的可能性。其次,準備好所需的實(shí)驗器材,如無(wú)菌移液管、無(wú)菌試管,并確保這些器材是嚴格無(wú)菌的。此外,還需檢查胎牛血清的包裝是否完好無(wú)損,如有破損或污染,則不應使用。
胎牛血清這種混合物中,融化速度:蛋白質(zhì)等干物質(zhì)>水這類(lèi)溶劑,所以蛋白質(zhì)會(huì )先溶解析出,而水還是結成冰的狀態(tài),導致瓶子中間會(huì )出現一根透明的冰柱,而周?chē)鷦t會(huì )呈現上黃下紅的分層渾濁液的狀態(tài),在使用過(guò)程中很容易引起沉淀、混合不均勻、局部濃度過(guò)高等問(wèn)題,影響細胞生長(cháng)。
更重要的一點(diǎn)是,血清中珍貴的生長(cháng)因子等活性物質(zhì),它們在解凍過(guò)程中,有著(zhù)與細胞復蘇類(lèi)似的經(jīng)歷,都需要快速解凍才能很大程度地保留生物活性。顯然,4℃過(guò)夜這樣的長(cháng)時(shí)間處理,很有可能會(huì )導致一部分「營(yíng)養成分」的損失,影響細胞生長(cháng)。因此,正確的解凍方法,應該是盡可能讓胎牛血清所有成分同時(shí)融化。
我們推薦使用更科學(xué)“三步法"對胎牛血清進(jìn)行解凍。根據待解凍的胎牛血清的量不同,按照下表中的建議時(shí)長(cháng)與溫度對其進(jìn)行處理。需要注意的是,如果血清是儲存在-80℃冰箱中,正式解凍前應先轉移至-20℃冰箱中過(guò)渡。
操作 | 溫度 | 100ml | 500ml | 1000ml |
步驟一 | 室溫 | 35 min | 90 min | 100 min |
或15-20℃水浴 | 5 min | 18 min | 20 min | |
步驟二 | 20℃水浴 | 15 min | 25 min | 30 min |
步驟三 | 37℃水浴 | 20 min | 35 min | 45 min |