弧菌顯色培養基配方的選定和制備方法
稱(chēng)取本品18.46g加入200ml蒸餾水,加熱煮沸溶解并不停攪拌,加熱10-20分鐘。冷卻至45-50℃時(shí),傾入無(wú)菌平皿。
注意:制備好的培養基一定要保持表面干燥,可在37℃的培養箱中倒置放置1-2小時(shí)。
弧菌顯色培養基操作步驟
1、按國家標準、SN標準、FDA標準或其它方法制備樣品液;
2、取1ml樣品液加入9mlSCPB肉湯或堿性蛋白胨水中,37℃增菌培養18-24小時(shí);
3、用3mm接種環(huán)取1環(huán)增菌液,劃線(xiàn)接種到副溶血性弧菌顯色培養基上,做2個(gè)平板;
4、37℃培養18-24h,溶血性弧菌顯藍色至藍綠色,霍亂弧菌和其它弧菌顯無(wú)色,其它細菌顯黃色或無(wú)色且菌落很??;
5、對可疑菌落可劃線(xiàn)接種到營(yíng)養瓊脂平板上,36±1℃培養12-16小時(shí),挑取單菌落做副溶血性弧菌全套生化試驗。
弧菌顯色培養基制備的基本方法和注意事項
1.弧菌顯色培養基配方的選定
同一種培養基的配方在不同著(zhù)作中常會(huì )有某些差別。因此,除所用的是標準方法,應嚴格按其規定進(jìn)行配制外.一般均應盡量收集有關(guān)資料.加以比較核對.再依據自己的使用目的加以選用,記錄其來(lái)源。
2.培養基的制備記錄
每次制備培養基均應有記錄,包括培養推各稱(chēng),配方及其來(lái)源.和各種成份的牌號。zui終pH值、消毒的溫度和時(shí)間制各的日期和制備者等,記錄應復制一份,原記錄保存備查,復制記錄隨制好的培養基一同存放、以防發(fā)生混亂。
3.弧菌顯色培養基成分的稱(chēng)取
培養基的各種成分必須稱(chēng)取并要注意防止錯亂.一次完成,不要中斷??蓪⑴浞街糜诎鴤?,每稱(chēng)完一種成分即在配方上做出記號,并將所需稱(chēng)取的藥品一次取齊,置于左側,每種稱(chēng)取完畢后,即移放于右側。*稱(chēng)取完畢后.還應進(jìn)行一次檢查。
4.弧菌顯色培養基各成份的混合和溶化
培養基所用化學(xué)藥品均應是化學(xué)純的。使用的蒸煮鍋不得為銅鍋或鐵鍋,以防有微量銅或鐵混入培養基中,使細菌不易生長(cháng)。使用不銹鋼鍋加熱溶化.也可放入大燒杯或大燒瓶中置高壓蒸汽滅菌器或流動(dòng)蒸汽消毒器中蒸煮溶化。在鍋中溶化時(shí)、可先用溫水加熱并隨時(shí)擾動(dòng),以防焦化、如發(fā)現有焦化現象、該培養基即不能使用,應重新制備。待大部分固體成分溶化后,再用較小火力使所有成分*溶化.迄至煮沸。如為瓊脂培養基,應先用一部分水將瓊脂溶化,用另一部分水溶化其它成分,然后將兩溶液充分混合。在加熱溶化過(guò)程中,因蒸發(fā)而丟失的水分,zui后必須加以補足。
5.培養塞pH的初步調整
培養基各成分*溶解后,應進(jìn)行pH的初步調正,因培養基在加熱消毒過(guò)程中、pH會(huì )有所變化,例如,牛肉浸液約可降低pH0.2.而腸浸液pH卻會(huì )有顯著(zhù)的升高。因此,對這個(gè)步驟,操作者應隨時(shí)注意探索經(jīng)驗、以期能掌握培養基的zui終pH,保證培養基的質(zhì)量。pH調正后,還應將培養基煮沸數分鐘,以利培養基沉淀物的析出。