關(guān)于SFRE 199細胞培養基的研究

SFRE 199，是對M199培養基的改良型，初研發(fā)是為了生長(cháng)和維持培養Bak細胞（原代狒狒腎細胞）。SFRE 199分為I型和II型，即SFRE 199-1和SFRE 199-2。

SFRE 199與M199的不同點(diǎn)在于升高了8種氨基酸（精氨酸-鹽酸、半胱氨酸、胱氨酸、L -谷氨酰胺、L -谷氨酸、甘氨酸、組氨酸、酪氨酸）和葡萄糖的濃度，并加入硫酸鋅、丙酮酸鈉和魚(yú)精蛋白鋅胰島素。另外，還降低了硝酸鐵、黃嘌呤和碳酸氫鈉的濃度。SFRE 199-1與SFRE 199-2的不同在于，前者含有Hank's鹽，而后者所含為Earle's鹽。

SFRE-199將M199標準配方中的精氨酸增加到150mg/L，半胱氨酸增至4mg/L，胱氨酸增至40mg/L，谷氨酰胺增至300mg/L，谷氨酸增至75mg/L，甘氨酸增至100mg/l，組氨酸增至40mg/L，酪氨酸增至80mg/L，以獲得大的細胞生長(cháng)而未表現出毒性。與加胎牛血清的常規培養基比較，細胞生長(cháng)速率、產(chǎn)量和蛋白容量均相同。均在移植后第6天單層細胞達到充分融合。

有報道，在SFRE 199-1生長(cháng)的原代Bak細胞的群體二倍分裂時(shí)間(PDT)約為34.2小時(shí)，與加有5%牛血清的HLH(含水解乳白蛋白的HBSS)相同，加有3%胎牛血清的M199的PDT為36小時(shí)。如果在SFRE 199-1中去除胰島素或硫酸鋅，則細胞不能融合，PDT延長(cháng)。若含有胰島素和硫酸鋅，則其支持生長(cháng)的能力相當于標準對照血清培養基。

SFRE 199培養基中除了葡萄糖，還添加了半乳糖，以避免乳酸過(guò)度積累。實(shí)驗發(fā)現，添加的D(+)—半乳糖1000mg/L，可使乳酸合成降低54.5%，在21天的觀(guān)察期間培養基的pH保持穩定（7.3-7.4）。若培養基pH降到6.8，則培養很難維持。

HiMedia公司生產(chǎn)的SFRE 199培養基不含胰島素和碳酸氫鈉，需在使用前單獨添加。建議用1N HCl或1N NaOH將pH調低理想pH值的0.2-0.3個(gè)pH單位，因為過(guò)濾會(huì )使pH值略微升高。根據需要，還可以無(wú)菌添加其他成分，以保證個(gè)性培養基的優(yōu)化。

SFRE 199培養基有多種應用。除培養Bak細胞外，有報道用不加血清的SFRE-199-2培養牛輸卵管峽部上皮細胞和壺腹上皮細胞，體外研究牛的受孕過(guò)程。也有報道用SFRE 199-1無(wú)血清培養基培養Vero細胞效果較優(yōu)。而Vero細胞常用于狂犬病疫苗，乙腦疫苗等的生產(chǎn)。因此，SFRE 199培養基具有極大的作為無(wú)血清培養基用于疫苗生產(chǎn)的潛力。

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