目前,動(dòng)物細胞大規模培養已廣泛應用于人用疫苗、獸用疫苗、基因治療藥物等生物制品的生產(chǎn)。理想目標是實(shí)現細胞的高密度培養、高密度表達,保證大規模生產(chǎn)的產(chǎn)品質(zhì)量。其中,用于細胞大規模培養的培養基是一大關(guān)鍵要素。
傳統疫苗生產(chǎn)多采用M199、DMEM、MEM等培養基加新生牛血清的方式,但由于血清成分的復雜性和不確定性,采用無(wú)血清細胞培養基已成為疫苗生產(chǎn)的發(fā)展趨勢。
SFRE 199是對M199培養基的改良型。和M199相比,SFRE 199顯著(zhù)升高了8種氨基酸的濃度,包括精氨酸、半胱氨酸、胱氨酸、谷氨酰胺、谷氨酸、甘氨酸、組氨酸、酪氨酸,也升高了葡萄糖的濃度,使能獲得大的細胞生長(cháng)而不表現出毒性。另外,加入了硫酸鋅、丙酮酸鈉和胰島素,降低了硝酸鐵、黃嘌呤和碳酸氫鈉的濃度,還添加了半乳糖,以避免乳酸過(guò)度積累,并使細胞在維持的延長(cháng)期內,pH值保持在生理范圍。
SFRE 199分為2種:SFRE 199-1與SFRE 199-2。其不同在于,前者含有Hank's鹽。而后者為Earle's鹽。SFRE 199初用于Bak細胞(原代狒狒腎細胞)的生長(cháng)和維持。國外有研究表明,SFRE 199不加胎牛血清即可用于培養Bak細胞,它與添加胎牛血清的常規培養基(M199、MEM)相比,細胞生長(cháng)速率、產(chǎn)量和蛋白容量均相同,群體二倍分裂時(shí)間縮短,而生長(cháng)的病毒滴度無(wú)明顯差別1,2。
Bak細胞超微結構。未受病毒感染的Bak細胞用SFRE 199-1培養后,胞漿中出現更多糖原樣小顆粒(和傳統培養基相比)2
Vero細胞是世界衛生組織和我國生物制品規程認可的疫苗生產(chǎn)細胞系,常用于生產(chǎn)狂犬病疫苗、流感疫苗、脊髓灰質(zhì)炎疫苗、腸道病毒71疫苗等。Vero細胞無(wú)血清培養基的工藝開(kāi)發(fā),已成為各國的熱點(diǎn)。國外有研究表明,SFRE 199-1可作為無(wú)血清培養基的基礎成分,用于Vero細胞的培養3,并在Vero細胞靜置培養中,以SFRE 199-1為基礎的無(wú)血清培養基可獲得細胞生長(cháng)效果4。
總之,對傳統培養基進(jìn)行改良以獲得更高的細胞活力和密度、獲得更快的病毒增殖速度和更高的病毒滴度,已成為各個(gè)藥廠(chǎng)不斷努力的目標。細胞培養基的高品質(zhì)和個(gè)性化,對目標的實(shí)現尤為重要。北京締一生物作為的細胞培養基生產(chǎn)商HiMedia的國內總代理,愿與各個(gè)藥廠(chǎng)竭誠展開(kāi)合作,提供的產(chǎn)品,為中國的生命科學(xué)助力加油!
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1. 吳長(cháng)安. 無(wú)血清化學(xué)限定培養基對原代細胞的培養及其對病毒的敏感性. 國外醫學(xué).生物制品分冊. 1981, 4:190-191
2. S.A.Weiss, et al. Chemically defined serum-free media for the c*tion of primary cells and their susceptibility to viruses. In Vitro.1980,16(7):616-628
3. Jack Litwin. The growth of Vero cells in suspension as cell-aggregates in serum-free media. Cytotecnology 10:169-174,1992
4. Jack Litwin. The growth of Vero cells as suspended aggregates in serum-free medium.Animal Cell Technology, 1992: 414-417
HiMedia簡(jiǎn)介:
1975年成立,的生物科學(xué)公司。近50年一直致力于細胞培養基和微生物培養基的研發(fā)和生產(chǎn),是通過(guò)WHO GMP認證的培養基生產(chǎn)廠(chǎng)家,并具有ISO9001,ISO13485:2003認證,CE認證和FDA注冊登記。HiMedia公司具有先進(jìn)的生產(chǎn)工藝和嚴格的質(zhì)量管理體系,為制藥、疫苗生產(chǎn)、食品工業(yè)、實(shí)驗室科研等領(lǐng)域,提供高質(zhì)量的產(chǎn)品。其產(chǎn)品已行銷(xiāo)140多個(gè)國家。