Vero細胞是世界衛生組織和中國生物制品規程認可的病毒疫苗生產(chǎn)細胞系 。采用 V ero 細胞培養技術(shù)生產(chǎn)的病毒疫苗主要包括狂犬病疫苗、脊髓灰質(zhì)炎疫苗、流感疫苗、乙型腦炎疫苗、出血熱疫苗和手足口病疫苗等。Vero細胞有貼壁特性,很大程度上決定了病毒疫苗的生產(chǎn)是通過(guò)Vero細胞的微載體固定化培養而得以實(shí)現。
軍科院生物工程所曾比較了四種商品化微載體對Vero細胞生長(cháng)的影響。他們先取適量的微載體,然后用PBS浸泡過(guò)夜,再吸出PBS,用PBS清洗3次,再高壓消毒后,加入含1%新生牛血清的DMEM/F12,放置在37℃培養箱備用。
Vero細胞則按2X105細胞/ml接種培養瓶和轉瓶,再加入含1%新生牛血清的DMEM/F12,置37℃培養箱培養。需要時(shí)進(jìn)行傳代。之后將該細胞作為種子細胞。
然后將固定質(zhì)量的4種微載體分別移入250mlBellco攪拌式細胞培養瓶。Vero細胞接種后,補足培養基至100ml,設置攪拌速度為30r/min懸浮培養。根據培養基顏色在必要時(shí)更換新鮮培養基。
研究人員用顯微鏡觀(guān)察細胞形態(tài),并取1ml細胞懸液進(jìn)行細胞計數以測定Vero細胞密度和活力(儀器采用細胞密度和活力自動(dòng)分析儀),采用多參數生物分析系統定量檢測細胞培養上清中的葡萄糖、乳酸和谷氨酰胺濃度,因而可測算葡萄糖比消耗速率,乳酸比生產(chǎn)速率等。
微載體固定化培養被廣泛應用于病毒疫苗和重組蛋白藥物生產(chǎn)。結果顯示,在四種商品化微載體中,Cytodex 1微載體(固體實(shí)心微球)效果較好,細胞密度高。同時(shí)細胞代謝速率在四種微載體中都很接近。研究者還指出,Vero細胞在接種后24h才基本完成貼壁階段。
在該次培養中,新生牛血清用量為1%,雖然用量較少,但仍*。上海締一生物生物公司進(jìn)口的澳洲產(chǎn)Ausbian精制新生牛血清(γ照射)系新西蘭血源(來(lái)自新西蘭政府獸醫管理局監管下的具有出口注冊證的正規屠宰場(chǎng)),GMP標準生產(chǎn)。
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參考文獻
劉紅,等. Vero細胞在不同微載體固定化培養中的生長(cháng)和代謝. 現代生物醫學(xué)進(jìn)展. 2012, 12 (36): 7001-7006