新生牛血清被廣泛應用于疫苗產(chǎn)品等大量生產(chǎn)生物制品領(lǐng)域,而培養干細胞大部分實(shí)驗室仍采用品質(zhì)更高的胎牛血清,其實(shí)在培養腸道干細胞已經(jīng)有實(shí)驗室采用新生牛血清嘗試培養,下面我們來(lái)看看相關(guān)實(shí)驗結果。
腸道干細胞位于腸隱窩內,在維持腸道屏障結構和功能完整方面扮演著(zhù)重要角色。用體外培養技術(shù)對腸干細胞進(jìn)行原代培養,以進(jìn)一步了解其增殖分化機制,這對治療腸道相關(guān)疾病具有重要意義。而血清品質(zhì)和濃度對原代細胞貼壁和生長(cháng)則具有相當大的影響。有人曾嘗試采用DMEM加新生牛血清或胎牛血清進(jìn)行腸道干細胞的原代培養。嘗試的血清濃度分別為 5%、10%、15%及 20%,并且還加入表皮生長(cháng)因子20ng/ml、胰島素2 g/ml、谷氨酰胺 2 mmol/ml、青霉素及鏈霉素各 100 U/ml。腸干細胞的鑒定則采用用角蛋白18抗體(腸干細胞為陽(yáng)性)以及波形蛋白抗體(腸干細胞為陰性,間質(zhì)細胞為陽(yáng)性)進(jìn)行組化染色和鑒定。
作者對胚胎鼠腸組織進(jìn)行的腸干細胞的分離和培養。結果顯示,只有采用10%新生牛血清加DMEM的培養方式效果很好,在培養24~48h后,貼壁生長(cháng)的細胞絕大部分為上皮細胞,上皮樣細胞呈集落狀生長(cháng),這與國外報道的細胞形
態(tài)基本符合,其雜質(zhì)細胞卻很少見(jiàn)到。而其他血清加DMEM的培養則鏡下顯示,細胞含有大量呈梭狀的間質(zhì)細胞,上皮細胞所占比例不足 5%。由上可見(jiàn),采
用含10%新生牛血清的細胞培養基進(jìn)行腸干細胞群的構建可以獲得較為純化的腸干細胞群,角蛋白18染色陽(yáng)性,波形蛋白染色陰性。因此,選擇合適的血清質(zhì)量和濃度對干細胞的培養有著(zhù)十分重要的意義。