牛血清根據采血的時(shí)間不同大體分為,胎牛血清、新生牛血清和小牛血清三類(lèi)。胎牛血清是在母牛懷孕5-8個(gè)月時(shí),通過(guò)胎牛心臟穿刺采血獲取的血清;新生牛血清是來(lái)自剛出生~出生后2周內的新生牛靜脈取血;小牛血清則是對出生~出生后2周內的新生牛靜脈取血。
血清促細胞生長(cháng)因子、促貼附因子、激素及其他活性物質(zhì)等組份與比例不同。胎牛血清尤其含有胚胎發(fā)育所必需的生長(cháng)因子。一些生長(cháng)因子到胎牛10個(gè)月時(shí)就消失了。
某些細胞必需胎牛血清才能生長(cháng),而有些細胞只需小牛血清即可。使用濃度一般在5%-10%,有特殊要求的濃度在20%。血清保存和使用須注意:血清應保存在-5℃至-20℃。解凍血清時(shí),推薦我們總結出來(lái)的三步法(見(jiàn)下表),可預防沉淀發(fā)生。不推薦血清4℃過(guò)夜融化,更不能直接將冷凍的血清放入37℃水浴或者溫箱中。因為血清在融化時(shí),蛋白先融,冰塊后融,局部蛋白濃度過(guò)高,易發(fā)生沉淀。血清在解凍后,應按用量分裝并于-20℃保存,避免反復凍融。
溫度 100ml血清500ml血清
di一步 室溫 35分鐘 90分鐘
或15-20℃水浴 5分鐘 18分鐘
第二步 20℃水浴15分鐘 25分鐘
第三步 37℃水浴20分鐘 35分鐘
注意:在水浴過(guò)程中,血清的液面要*浸在水中。在融化過(guò)程中要慢慢搖動(dòng),使血清混勻,但不要產(chǎn)生泡沫!
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