研究揭示miR-133a的轉(zhuǎn)錄調(diào)控機(jī)制及其在細(xì)胞分化中的作用

9月9日，學(xué)術(shù)期刊Cell Death & Disease發(fā)表了中國(guó)科學(xué)院生物物理研究所衛(wèi)濤濤課題組與美國(guó)Creighton大學(xué)屠亞平課題組的合作論文，這是衛(wèi)濤濤課題組與屠亞平課題組長(zhǎng)期合作所取得的又一成果。研究人員發(fā)現(xiàn)，miR-133a表達(dá)的上調(diào)促進(jìn)了線粒體生物發(fā)生和肌細(xì)胞分化，并進(jìn)一步通過(guò)“定向染色質(zhì)構(gòu)象捕獲”（CAPTURE）技術(shù)找到了調(diào)控miR-133a表達(dá)的上游調(diào)控因子KAP1，從而加深了對(duì)miR-133a轉(zhuǎn)錄調(diào)控機(jī)制及重要功能的了解。

microRNA（miRNA）在多種生理及病理生理過(guò)程中起著重要的調(diào)控作用。在前期工作中，衛(wèi)濤濤課題組與屠亞平課題組密切合作，通過(guò)分子、細(xì)胞及動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證明，TGF-β1誘導(dǎo)表達(dá)的miR-133a可通過(guò)負(fù)反饋調(diào)節(jié)的方式作用于TGF-β1受體及其效應(yīng)分子，負(fù)調(diào)控TGF-β1信號(hào)通路，從而抑制甚至部分逆轉(zhuǎn)特發(fā)性肺纖維化（IPF）的進(jìn)程，相關(guān)論文于2019年9月11日發(fā)表于Cell Death & Disease雜志。

鑒于miR-133a的重要生理及病理生理學(xué)作用，探明其調(diào)控機(jī)制將對(duì)治療肺纖維化等相關(guān)疾病提供重要的線索。衛(wèi)濤濤課題組與屠亞平課題組進(jìn)一步以成肌細(xì)胞分化過(guò)程中miR-133a動(dòng)態(tài)表達(dá)為模型，使用基于CRISPR/Cas9的CAPTURE技術(shù)，結(jié)合高通量測(cè)序及生物信息學(xué)分析，系統(tǒng)研究了miR-133a表達(dá)的調(diào)控機(jī)制，發(fā)現(xiàn)KAP1相關(guān)的轉(zhuǎn)錄調(diào)控復(fù)合物可抑制C2C12成肌細(xì)胞中miR-133a的表達(dá)；敲低KAP1可增加miR-133a的表達(dá)，此過(guò)程伴隨線粒體生物發(fā)生和C2C12成肌細(xì)胞分化；miR-133a的上調(diào)足以誘導(dǎo)線粒體生物發(fā)生和C2C12成肌細(xì)胞分化，而miR-133a抑制劑則顯著抑制細(xì)胞分化。

該研究*使用CAPTURE技術(shù)鑒定了細(xì)胞分化過(guò)程中調(diào)控miR-133a表達(dá)的重要因子，為理解microRNA的調(diào)控機(jī)制提供了新思路。

采用Ausbian進(jìn)口特級(jí)胎牛血清，透析過(guò)濾去除10000D以下小分子（如次黃嘌呤和胸腺核苷），避免外源小分子對(duì)細(xì)胞產(chǎn)生干擾。適合脈沖示蹤實(shí)驗(yàn)（例如同位素標(biāo)記特定小分子，并加入到培養(yǎng)體系中，以研究細(xì)胞代謝），也適合轉(zhuǎn)染CHO后的篩選等應(yīng)用。

儲(chǔ)存條件

-20°C凍存。

胎牛血清*解凍后，應(yīng)按單次習(xí)慣用量分裝，分裝后的血清仍-20°C凍存。

若置于4°C的血清，應(yīng)在一周內(nèi)用完。

為保證細(xì)胞培養(yǎng)的效果，血清和培養(yǎng)基的配置，應(yīng)遵循“現(xiàn)用現(xiàn)配”原則。配好的培養(yǎng)液，應(yīng)于一周內(nèi)用完。

血清避免反復(fù)凍融，避免在4°C或更高溫度儲(chǔ)存過(guò)久，否則會(huì)破壞血清中有效活性成分，影響血清品質(zhì)。

血清融化 專業(yè)方法：

目的;更好保留血清中活性成分，使細(xì)胞培養(yǎng)更穩(wěn)定。

推薦血清廠家 專業(yè)融化方法（此方法通用，適用于所有種類的血清）：

注意：

♦ 在水浴過(guò)程中，血清的平面要*浸在水中。在融化過(guò)程中要慢慢搖動(dòng)瓶身，使血清混勻，但搖動(dòng)中盡量不要產(chǎn)生泡沫!