人們之前認(rèn)為只有真菌DNA發(fā)生的突變才會導(dǎo)致對抗真菌藥物產(chǎn)生抗藥性。目前的診斷技術(shù)依賴于對真菌DNA進(jìn)行測序來尋找這樣的突變。
在一項(xiàng)新的研究中,來自英國愛丁堡大學(xué)的研究人員發(fā)現(xiàn)真菌可以在不改變它們的DNA---它們的遺傳密碼---的情形下產(chǎn)生抗藥性。相關(guān)研究結(jié)果發(fā)表在2020年9月17日的Nature期刊上,論文標(biāo)題為“Epigenetic gene silencing by heterochromatin primes fungal resistance”。
這項(xiàng)新的研究發(fā)現(xiàn),真菌可以在沒有基因變化的情況下出現(xiàn)抗藥性。相反,真菌表現(xiàn)出表觀遺傳變化---不影響它們的DNA的變化,這表明真菌抗藥性的許多原因可能在以前被忽略了。
每年真菌疾病影響十億人,據(jù)估計(jì)造成160萬人死亡??顾幮哉婢腥臼且粋€日益嚴(yán)重的問題,特別是在免疫系統(tǒng)較弱的患者中,如HIV感染者。目前有效的抗真菌藥物很少。
過度使用農(nóng)業(yè)殺真菌劑也導(dǎo)致土壤傳播的真菌的抗藥性增加。真菌疾病每年導(dǎo)致世界上多達(dá)三分之一的糧食作物損失。
在這項(xiàng)新的研究中,這些研究人員通過使用模擬抗真菌藥物活性的caffeine處理一種稱為裂殖酵母(Schizosaccharomyces pombe)的酵母菌,觀察到這種酵母菌出現(xiàn)抗藥性。他們發(fā)現(xiàn)由此產(chǎn)生的抗藥性酵母菌在影響它們的DNA組裝方式的特殊化學(xué)標(biāo)簽上發(fā)生了改變。一些基因被包裝在稱為異染色質(zhì)的結(jié)構(gòu)中,它使得基因沉默或失活,換言之,這種表觀遺傳變化導(dǎo)致這種酵母菌產(chǎn)生抗藥性。
這一發(fā)現(xiàn)可能為通過改進(jìn)現(xiàn)有的表觀遺傳藥物或開發(fā)干擾真菌異染色質(zhì)的新藥物來治療耐藥性真菌感染鋪平道路。
改進(jìn)的殺菌劑處理糧食作物可以限制農(nóng)業(yè)損失,也可以減少環(huán)境中持續(xù)加劇人類感染的抗藥性真菌菌株的數(shù)量。
論文通訊作者、愛丁堡大學(xué)生物科學(xué)學(xué)院細(xì)胞生物學(xué)研究所惠康細(xì)胞生物學(xué)中心的Robin Allshire教授說,“這些發(fā)現(xiàn)可能對理解植物、動物和人類真菌病原體如何對非常有限的有效抗真菌藥物治療產(chǎn)生抗藥性產(chǎn)生影響,我們的團(tuán)隊(duì)對此感到興奮。”
支原體是細(xì)胞外生存的小微生物,是一類缺乏細(xì)胞壁的原核細(xì)胞型微生物,大小一般在0.2~0.5um之間,呈高度多形性,有球形、桿形、絲形、分枝狀等多種態(tài)。
1、支原體存在于我們周圍,他可能就如塵埃一樣存在于我們的環(huán)境中
2、可透過一般的濾膜,所以不要寄希望于過濾可以清楚支原體污染的液體
支原體對培養(yǎng)細(xì)胞的污染發(fā)生率高,據(jù)估計(jì)平均發(fā)生率在60%左右。同時又非常隱秘,早期不容易被發(fā)現(xiàn),除非用特異性和靈敏度都非常高的檢測試劑盒。支原體因?yàn)閭€頭小,能穿過0.22微米濾器,并且在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)會潛在的擴(kuò)散。支原體污染使得用被污染的細(xì)胞樣本做的實(shí)驗(yàn)*失去意義和價(jià)值。
那我們在做細(xì)胞培養(yǎng)時如何檢測支原體呢?
1. 支原體常規(guī)PCR檢測試劑盒(一步法)
用途說明:
1)適合科研單位檢測,或單位內(nèi)檢,用PCR法檢測細(xì)胞或其他生物基質(zhì)。
2) 比藥典操作標(biāo)準(zhǔn)合并了一步,(將內(nèi)控對照試劑預(yù)先混合在PCR mix試劑中),操作更簡潔。
3)樣本量為2μl,靈敏度為20個基因組拷貝/反應(yīng)。結(jié)果準(zhǔn)確。
用途說明:
1) 符合歐洲藥典、中國藥典要求,更適合細(xì)胞治療,CAR-T,抗體藥、疫苗等臨床項(xiàng)目申報(bào)和質(zhì)檢。
2)樣本需先做DNA抽提。抽提后樣本加入量為10μl。
3)試劑盒中不含Taq酶,需另外購買。
4) 廠家可協(xié)助完善方法驗(yàn)證步驟。
3. 支原體常規(guī)PCR檢測試劑盒(經(jīng)典法,含Taq酶)
用途說明:
1) 符合歐洲藥典、中國藥典要求,更適合細(xì)胞治療,CAR-T,抗體藥、疫苗等臨床項(xiàng)目申報(bào)和質(zhì)檢。
2)樣本需先做DNA抽提。抽提后樣本加入量為10μl。
3)試劑盒中含Taq酶,無需另外購買。
4) 廠家可協(xié)助完善方法驗(yàn)證步驟。
4. 支原體常規(guī)PCR檢測試劑盒(預(yù)分裝法)
用途說明:
1)適合科研單位檢測,或單位內(nèi)檢,用PCR法檢測細(xì)胞或其他生物基質(zhì)。
2) 比一步法更為方便。表現(xiàn)在:
① PCR組分(包括酶、核苷酸、引物、內(nèi)控對照,均為凍干粉)和上樣緩沖液/染料已預(yù)先分裝在八連管中。
② PCR結(jié)束后,產(chǎn)物直接上膠,不需再加上樣緩沖液和染料。
3)價(jià)格比一步法略高。適合想節(jié)省時間、追求簡易的用戶。