胎牛血清是指懷孕5-8個(gè)月的母牛被屠宰后,發(fā)育未完quan的胎牛心臟穿刺采血后,通過(guò)一系列工藝處理最終獲得。此時(shí)胎牛血中含有特殊的生長(cháng)發(fā)育因子,一旦胚胎發(fā)育完quan這些因子自動(dòng)消失。那么,面對如此珍貴的胎牛血清,實(shí)驗人該如何防治黑點(diǎn)生成、如何儲存使用血清呢?
1、 細胞培養中如何防止黑點(diǎn)生成?
答:(1) 盡可能地減少血清凍融次數。
(2) 培養基無(wú)需37℃水浴。
(3) 培養基保持最佳PH值7.0- 7.2。
(4) 嚴格控制配制培養基的水質(zhì),容器定期刷洗。
(5) 掌握細胞傳代的最佳時(shí)機,細胞切勿生長(cháng)過(guò)老。
2、如何儲存使用血清?
答:儲存條件:血清一般儲存于-20℃,同時(shí)應避免反復凍融。購買(mǎi)大包裝的血清后,需要分裝成小包裝,儲存于-20℃,使用前融化。關(guān)于血清融化,我們推薦以三步來(lái)進(jìn)行(詳細可參閱《關(guān)于胎牛血清知識問(wèn)答(一)》)。例如,500ml的胎牛血清,首先在室溫條件下放置90min,然后再20℃水浴放置25min,最后在37℃水浴放置35分鐘即可。
使用濃度:自從有了合成培養基,血清就是作為一種添加成分與合成培養基混合使用,使用濃度一般為5-20%,常用是10%。過(guò)多血清容易使培養中的細胞發(fā)生變化,特別是一些二倍體的無(wú)限細胞系,迅速生長(cháng)之后容易發(fā)生惡性轉化。
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