細胞培養中的支原體檢測,分為工業(yè)檢測和實(shí)驗室檢測。
工業(yè)包括生物藥生產(chǎn)、CAR-T、干細胞治療、疫苗生產(chǎn)等,需要對主細胞庫、病毒收獲液、體外擴增的細胞等進(jìn)行支原體檢查。該檢查的方法依據是藥典。
普通科研實(shí)驗室中的支原體檢測則需要保證細胞中沒(méi)有支原體污染,沒(méi)有詳細的方法規定。
那么,工業(yè)和科研檢支原體還有哪些區別呢?
檢測方法方面
工業(yè)可使用培養法、指示細胞培養法和NAT法(核酸擴增技術(shù)Nucleic acid testing)。NAT法最常見(jiàn)的就是PCR和熒光定量PCR。只限定了這三種。NAT在方法驗證后,可以替代前面兩種方法。適合CAR-T等的放行檢測。
科研則可采用各種方法,但一般不采用培養法,因為該方法耗時(shí)長(cháng),效率低??蒲袡z支原體常見(jiàn)方法有PCR法、qPCR法、酶熒光法、恒溫擴增法、DNA染色法、細胞感應法等。
用途方面
工業(yè)檢支原體用于過(guò)程控制、放行檢測。生產(chǎn)前和生產(chǎn)后的成品都需要檢。
科研檢支原體是避免支原體污染細胞,干擾實(shí)驗,一般是一周就要監測一次。
污染程度
工業(yè)上支原體污染風(fēng)險主要是存在于細胞和成品中,需檢測的樣本,不一定是含血清的培養體系。在該過(guò)程中,如果發(fā)生支原體污染,通常情況下,支原體含量會(huì )比較低,因而需要方法的靈敏度高,達到10CFU/ml。
科研上支原體污染的風(fēng)險,主要是存在于細胞培養過(guò)程中??蒲羞^(guò)程中,如果發(fā)生支原體污染,往往因檢測不及時(shí)而更容易被忽視。再加上培養液中含有血清,支原體繁殖較快,一旦出現癥狀時(shí),支原體的污染程度已經(jīng)處于較高的水平,因而對方法的靈敏度相對會(huì )低一些,而更看重方便程度。
好物推薦
Minerva Biolabs支原體qPCR檢測試劑盒,遵循歐洲藥典流程要求,高特異性,一次檢測即可涵蓋了幾乎所有可能感染細胞的支原體物種(涵蓋歐洲藥典規定的9種支原體),根據序列一致性,至少可以檢測到107種支原體物種。操作簡(jiǎn)單,易于觀(guān)察。