支原體qPCR法介紹:
熒光定量PCR法(qPCR):是在常規PCR基礎上,將『針對支原體特異性保守序列的探針』做熒光標記,使PCR擴增后的產(chǎn)物帶有熒光,利用熒光信號的變化和配套軟件,進(jìn)行DNA擴增反應的實(shí)時(shí)監測,簡(jiǎn)稱(chēng)qPCR。
優(yōu)點(diǎn):
①靈敏度高、特異性強。
②時(shí)間短,2-3小時(shí)出結果
③檢測結果可定量
④操作簡(jiǎn)便
缺點(diǎn):
①對于已做支原體滅活處理的樣品,由于支原體DNA仍舊存在其中,PCR結果會(huì )出現假陽(yáng)性。(可用培養法做補充驗證)
②不同廠(chǎng)家生產(chǎn)的試劑盒質(zhì)量差異巨大(由于引物及內在設計不同),需謹慎選擇,盡量在專(zhuān)業(yè)人員推薦指導下使用。
『支原體qPCR檢測試劑盒』介紹
德國MB公司生產(chǎn)的支原體qPCR檢測試劑盒(均為探針?lè )z測),依據操作步驟的細微差別, 分『經(jīng)典法』和『一步法』兩種。
此兩類(lèi)試劑盒較其他廠(chǎng)家同類(lèi)產(chǎn)品,具有以下的優(yōu)點(diǎn):
①經(jīng)典法qPCR試劑盒遵循歐洲藥典流程要求
②高特異性,一次檢測即可涵蓋了所有可能感染細胞的支原體物種(涵蓋歐洲藥典規定的9種支原體),根據序列一致性,至少可以檢測到107種支原體物種。操作簡(jiǎn)單,易于觀(guān)察。(使用MB的試劑盒,下表中列出的支原體物種均為陽(yáng)性,其他微生物或真核細胞均為陰性,無(wú)交叉反應)
③高靈敏度,MB公司的經(jīng)典法試劑盒zui低檢測限可達到≤10CFU/ml。
④MB公司有相應配套的10CFU/100CFU的敏感度測試的標準品,便于方法學(xué)驗證。
⑤MB公司有相應配套的支原體基因組DNA和細菌基因組DNA,便于特異性驗證。
⑥MB公司有相應配套的支原體絕對定量標準品,便于最后定量檢測。
特點(diǎn)
1.內控對照為獨立包裝,遵循歐洲藥典和日本藥典操作流程。
2.高特異性,一次檢測即可涵蓋所有常見(jiàn)易感染細胞的支原體物種(包括歐洲藥典規定的9種支原體)。與細菌和真核DNA無(wú)交叉反應。
3.高靈敏度,zui低檢測限可達到≤10CFU/ml。
4.相應配套的支原體基因組DNA和細菌基因組DNA,便于特異性驗證。
5.有相應配套的支原體絕對定量標準品,便于最后定量檢測