PCR怎樣才能『準確靈敏且穩定』?這些關(guān)鍵點(diǎn)需注意!
更新時(shí)間:2023-05-23 | 點(diǎn)擊率:515
PCR(其中包含qPCR)是一種常用的分子生物學(xué)技術(shù),作為一類(lèi)基礎的實(shí)驗,具有重要的應用價(jià)值。
除了常見(jiàn)的基因表達分析這類(lèi)理論研究中,需要用到PCR技術(shù),在臨床檢測、藥物生產(chǎn)過(guò)程監控等流程中,也會(huì )用到PCR技術(shù)。其中,用于細胞治療、疫苗生產(chǎn)等過(guò)程支原體檢測的,德國Minerva Biolabs支原體檢測試劑盒,也是基于qPCR的原理。
PCR實(shí)驗結果的準確性、靈敏性和穩定性,很大程度上會(huì )影響后續其他實(shí)驗。在生物藥項目申報等過(guò)程中,如果支原體檢測結果出現偏差,將有可能導致項目申報的失敗。因此,保證PCR實(shí)驗結果的準確性、靈敏性和穩定性十分重要。
Point 1 清潔實(shí)驗環(huán)境
PCR實(shí)驗造成DNA大量合成,常常會(huì )給實(shí)驗室帶來(lái)核酸污染。由于核酸產(chǎn)物不能自動(dòng)降解,因此DNA污染會(huì )不斷積聚。
由于PCR本身的特點(diǎn),少量污染的DNA或RNA分子也會(huì )被檢測出來(lái),從而造成實(shí)驗偏差。
傳統的紫外照射,僅對500bp以上長(cháng)片段有效,對短片段效果不大,因此,該方法對祛除DNA污染并不理想。那么問(wèn)題來(lái)了,該如何有效清除核酸污染?
使用德國Minerva Biolabs公司(簡(jiǎn)稱(chēng)MB)的PCR污染祛除劑PCR Clean™。
PCR Clean™有噴霧和濕巾兩種樣式,在1分鐘之內即可有效地祛除核酸污染(對質(zhì)粒、基因組和DNA、RNA擴增片段均有效),適合各種實(shí)驗臺、操作區域、設備和實(shí)驗耗材,高效迅速,使用方便。
合適的樣品制備,包括DNA提取和純化,可以幫助防止可能干擾PCR擴增的污染物或抑制劑的引入。
在檢測細胞中是否含有支原體時(shí),除支原體檢測試劑盒Venor®Gem qEP以及標準品外,建議配套使用德國MB支原體DNA提取試劑盒,保證實(shí)驗的穩定性。