2017年,ISO出臺了一個(gè)沙門(mén)氏菌檢查的標準,即ISO 6579-1-2017 食物鏈的微生物 沙門(mén)氏菌檢測計數和血清分型的水平方法。第1部分是沙門(mén)氏菌屬的檢測。該方法面向的是食品、乳與乳制品、動(dòng)物飼料、動(dòng)物糞便和食品加工處理的環(huán)境樣品。下面將該方法簡(jiǎn)要描述一下:
步:預增菌。
ISO推薦的仍是緩沖蛋白胨水(簡(jiǎn)稱(chēng)BPW)(非選擇性液體培養基):先將BPW放置室溫。接種后,34-38℃孵育18h。如果是大量樣品(1L以上),則建議先將BPW預熱至34-38℃,再和樣品混合。ISO指出:沙門(mén)氏菌經(jīng)常小量存在,并伴隨有大量的其他腸桿菌科成員。預增菌的目的是用于能檢測到低豐度的沙門(mén)氏菌或受損傷的沙門(mén)氏菌。
第二步:選擇性增菌。
ISO推薦是兩種選擇性增菌培養基,同時(shí)使用。種是含大豆的RVS肉湯或MSRV瓊脂(Rappaport-Vassiliadis瓊脂),41.5℃孵育24h,第二種是MKTTn肉湯,37℃孵育24h。ISO還指出,MSRV瓊脂適合有動(dòng)力的沙門(mén)氏菌,不適合無(wú)動(dòng)力的沙門(mén)氏菌。
第三步:分離。
即接種到推薦的兩種選擇性固體培養基上。種是XLD瓊脂,37℃孵育24h以上。典型菌落為黑色中心,紅色輕微透明光暈。但有個(gè)別例外,即H2S陰性沙門(mén)氏菌變種為粉色菌落,深粉色中心;乳糖發(fā)酵陽(yáng)性的沙門(mén)氏菌為黃色菌落,有或沒(méi)有黑色中心。ISO推薦再選用一個(gè)選擇性培養基進(jìn)行分離。我們推薦HiMedia公司生產(chǎn)的顯色培養基HiCrome 沙門(mén)氏菌HiVeg 瓊脂(貨號MV1296)HiCrome是HiMedia顯色培養基的標識,HiVeg是培養基無(wú)動(dòng)物成分,用植物蛋白胨取代動(dòng)物蛋白胨的標識,這樣培養基無(wú)動(dòng)物源成分帶來(lái)的瘋牛病風(fēng)險。
該顯色培養基建立在Rambach瓊脂基礎上,沙門(mén)氏菌菌落(包括腸炎沙門(mén)菌、鼠傷寒沙門(mén)菌、傷寒沙門(mén)菌)為淡紫色,有光暈,大腸桿菌為藍色菌落,奇異變形桿菌為無(wú)色菌落(見(jiàn)下圖)。該培養基特異性高,接種50-100CFU沙門(mén)氏菌,回收率≥50%。
第四步:驗證。
用生化試驗或血清學(xué)試驗驗證。使用生化鑒定試劑盒(鑒定條)則相當方便,我們推薦HiMedia生產(chǎn)的沙門(mén)氏菌鑒定試劑盒(KB011)。該鑒定條集成了7項生化試驗和5項糖發(fā)酵試驗,可鑒定18種沙門(mén)氏菌,許多是鑒定到種。對于菌株的鑒定,則應進(jìn)行血清學(xué)試驗。
(HiMedia生化鑒定條示意圖)
“ISO 6579-1-2017”和我國《GB 4789.4-2016 食品安全國家標準 食品微生物學(xué)檢驗 沙門(mén)氏菌檢驗》相比,在增菌上和分離步驟上,都有一些不同。尤其是分離步驟進(jìn)行了簡(jiǎn)化。因為市面上的沙門(mén)氏菌顯色培養基眾多,ISO只是推薦再選用一個(gè)選擇性培養基進(jìn)行分離,而沒(méi)有明確指出是哪一類(lèi)或是原理是什么。但HiMedia開(kāi)發(fā)的沙門(mén)氏菌顯色培養基顯然是值得注意和推薦的一款,其沙門(mén)氏菌落上帶有紅色光暈,尤其容易辨識。